GIBCO馬血清熱滅活

GIBCO馬血清熱滅活

英文名：Heat-Inactivated Horse Serum

規格：500ML

貨號：26050-088

GIBCO馬血清熱滅活 通常作為補充成分添加在基礎培養基內使用。它能夠提供各種大分子蛋白，小分子量營(yíng)養，水溶性成分的轉運蛋白，和其它一些細胞在體外所必需的成分，如激素和附著(zhù)因子。血清可以結合或中和一些生長(cháng)因子中的有毒成分，并提供培養基的緩沖能力。細胞培養時(shí)血清的添加依賴(lài)于基礎培養基的化學(xué)組成，培養細胞的類(lèi)型，及所用的培養系統。

我們在提供細胞培養基、平衡鹽溶液、無(wú)血清培養基和試劑的同時(shí)，還提供高品質(zhì)的血清。我們對血清制備進(jìn)行全過(guò)程監管。從血清收集到zui終產(chǎn)品檢驗和內部稽核的每一個(gè)步驟，我們都采用設備和標準操作程序，以確保整個(gè)過(guò)程中每個(gè)環(huán)節的產(chǎn)品質(zhì)量。對整個(gè)過(guò)程的控制可以保證產(chǎn)品的持續高品質(zhì)，降低不同批次的差異。

處理：全部血清：收集的血液均在冷藏條件下處理。血清和血分離后立即將血清合并并冷凍。只有符合我們的檢測標準的血清才被接受作進(jìn)一步處理。

熱滅活血清：熱滅活是在56℃水浴中嚴格控溫30分鐘。透析血清：用10,000截留分子量的透析膜在0.15M的NaCl中進(jìn)行透析，直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用鄰甲苯胺測試法檢驗)。γ射線(xiàn)照射血清：可按客戶(hù)要求對血清進(jìn)行γ射線(xiàn)照射。通過(guò)γ射線(xiàn)照射以滅活各種動(dòng)物血清(包括胎牛血清、新生牛血清、豬血清和馬血清)中的病毒和支原體的方法已經(jīng)得到證實(shí)。研究證實(shí)照射劑量在30-45kGy為宜。血清在此照射后物理化學(xué)特性和細胞培養表現沒(méi)有變化。裝瓶：粗血清須通過(guò)一系列的過(guò)濾才成為成品。zui后的過(guò)濾步驟包括使用0.2um和0.1um的無(wú)菌過(guò)濾。胎牛血清須通過(guò)三次0.1um過(guò)濾，其他血清須通過(guò)0.2um過(guò)濾。zui終產(chǎn)品的質(zhì)量控制：我們采取以下方法對每一批次的產(chǎn)品選取一定數量的樣品進(jìn)行質(zhì)量控制分析：

化學(xué)檢測：使用低溫凝固點(diǎn)的方法檢測滲透壓，以保證符合產(chǎn)品規范。我們每天使用國家標準的技術(shù)研究所標定的標準溶液對我們的滲透壓檢測儀器進(jìn)行校準。同樣每天使用國家標準技術(shù)研究所標定的標準溶液對pH計進(jìn)行校準。

使用電泳圖譜鑒定血清的整體性質(zhì)。樣品被轉移到硝酸纖維素基質(zhì)中，并在緩沖體系內遷移。條帶經(jīng)染色、清潔、干燥后用密度儀進(jìn)行掃描，以檢測白蛋白和球蛋白組分的相對濃度。為證實(shí)是否在適當的條件下進(jìn)行采血和處理，使用修飾的Fleming方法對血紅蛋白進(jìn)行分光光度檢測。

隨著(zhù)動(dòng)物年齡的增加，血清總蛋白含量也相應地提高。使用自動(dòng)化的Biuret方法進(jìn)行總血清蛋白的檢測，以確認動(dòng)物年齡并驗證符合產(chǎn)品規范。使用色度計在不同波長(cháng)下檢測樣品和Biuret試劑混合波的吸光度。自動(dòng)計算結果后，與標準曲線(xiàn)比較，即可得到蛋白值(克/公升)。

穩定性檢測程序：在每一個(gè)標記為體外診斷的產(chǎn)品上顯示的效期表明了這個(gè)產(chǎn)品具有多長(cháng)時(shí)間的效能。我們的穩定性程序確定和證明了產(chǎn)品效期。我們定期監測批量產(chǎn)品，確定產(chǎn)品在推薦貯存條件下具有可接受效果的時(shí)間長(cháng)度。

微生物學(xué)檢測：所有血清使用Barile&Kern的大體積方法檢測支原體。在推薦方法的檢測范圍內檢測結果是準確的。樣品至少應該在肉湯中合并培養3個(gè)星期，同時(shí)要在瓊脂平板上進(jìn)行不少于4次傳代培養。在有氧和厭氧(95%氮，5%CO2)條件下，平板在36±2℃下孵育。在檢測過(guò)程中，每周對瓊脂平板進(jìn)行一次微生物生長(cháng)情況檢驗。使用Dienes染色法對懷疑被污染的瓊脂平板進(jìn)行支原體菌落的檢測。然后，對平板進(jìn)行再次鏡檢。對孵育肉湯瓶要定期進(jìn)行濁度和pH值變動(dòng)的檢測。在推薦方法檢測范圍內，所有血清也要使用Hoechst熒光DNA染色法進(jìn)行不可在肉湯中培養的支原體(包括M.hyorhinis屬)檢測。

病毒檢測：已知無(wú)外來(lái)物質(zhì)的細胞培養基須經(jīng)過(guò)在包含15%測試血清的生長(cháng)培養基中進(jìn)行為期21天的三次傳代培養。使用對照培養基和已知對外來(lái)物質(zhì)為陰性的血清平行地維持陰性對照培養。整個(gè)期間，檢測所有的培養情況，以便發(fā)現是否存在病毒誘發(fā)的細胞形態(tài)改變或致細胞病變效應。在14至21天的培養期間，對含有檢測血清的平行培養瓶按下面標準病毒檢測方法進(jìn)行評估。

將其中一瓶檢測細胞用胰蛋白酶消化，然后把細胞分別加入到總面積為6cm 2 的六室載玻片上。同時(shí)準備陰性對照載玻片。在檢測培養的單室載玻片上加入牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、牛細小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼腸病毒的染色劑，作為單個(gè)的陽(yáng)性對照。再經(jīng)過(guò)7天培養(總共21天)，利用熒光抗體技術(shù)檢測病毒。

通過(guò)對檢測培養進(jìn)行蘇木精伊紅染色，觀(guān)察致細胞突變效應(CPE)或其他病毒誘導效應。檢測細胞是否存在CPE效應、內含物、多核體或其他異常效應。

內毒素檢測：我們用阿米巴變形細胞溶解物(LAL)凝膠法來(lái)檢測胎牛血清的內毒素含量。

效能檢測：
對每一批次的胎牛血清，我們都進(jìn)行下述培養效能檢測。選擇血清zui重要的標準是其支持特殊細胞的生長(cháng)能力。因此，除了保證血清通過(guò)嚴格的品質(zhì)控制，我們也同時(shí)在實(shí)驗室條件下對血清的三個(gè)重要的培養效能進(jìn)行檢測：克隆效率、貼壁效果和二倍體成纖維細胞生長(cháng)促進(jìn)。