做細胞培養實(shí)驗經(jīng)常會(huì )用到血清,當血清用不完我們會(huì )凍起來(lái)下次再次使用。但你有沒(méi)有發(fā)現有時(shí)候在融化血清過(guò)程中會(huì )出現白色的沉淀物質(zhì),出現這種情況是否血清出現問(wèn)題了呢?
首先我們要搞清楚血清中絮狀沉淀物是什么,沉淀物其實(shí)包含含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì )自然消失。
那怎么才能降低沉淀物的發(fā)生呢?
(1)解凍血清/分裝凍存時(shí),須規則搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2)勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì )變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成份也會(huì )因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(3)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
使用時(shí)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:
一、保存血清的方法:
血清應保存在-5℃至-20℃若存放于4℃時(shí),請勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,建議將無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
二、如何解凍血清才不會(huì )使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過(guò)程中必須規則地搖晃均勻。
三、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1.解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2.解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
3.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì )變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成分也會(huì )因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
5.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì )造成沉淀物的增多。
四、血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會(huì )阻塞過(guò)濾膜。