在描述產(chǎn)品區別之前,先簡(jiǎn)單描述下第3代間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基。
第3代間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基是怎么開(kāi)發(fā)出來(lái)的?
研發(fā)人員根據近幾十年來(lái),中國及國外的科研人員在間充質(zhì)干細胞研究方面取得的一些成果,比如什么樣的物質(zhì)可以很好的促進(jìn)干細胞生長(cháng),什么樣的物質(zhì)可以抑制間充質(zhì)干細胞的分化,什么樣的物質(zhì)有更好的貼壁效果等等。
在此基礎之上,開(kāi)發(fā)出一個(gè)初步的間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基配方。
然后,構建相應數學(xué)模型,結合大量的實(shí)驗,確定各種組分組合的比例。
后,通過(guò)應用于不同來(lái)源的人體組織(臍帶或脂肪),提取及培養間充質(zhì)干細胞,微調產(chǎn)品配方,使培養基能夠更為廣泛的適用于人體不同來(lái)源的組織中間充質(zhì)干細胞的提取及培養。
一句話(huà),是根據人們對干細胞的認識,專(zhuān)門(mén)開(kāi)發(fā)出來(lái)的針對間充質(zhì)干細胞的培養產(chǎn)品。
血清培養基是什么情況?
一般應用 DMEM/F12,或 a-MEM,加上胎牛血清。
一句話(huà),是天然形成的產(chǎn)品,無(wú)法根據干細胞的特點(diǎn)進(jìn)行對應調整與優(yōu)化。
第3代無(wú)血清 MSC 培養基與血清 MSC 培養基有什么不同?
從大的方面來(lái)講,大致有 9 個(gè)方面的不同。
1.從使用安全性來(lái)講
無(wú)血清 MSC 培養基更安全。
該培養基沒(méi)有添加血清,也沒(méi)有添加任何動(dòng)物來(lái)源的組分,化學(xué)成分限定。因此,該培養基沒(méi)有任何動(dòng)物來(lái)源組分,在這種間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基中培養的細胞進(jìn)入人體后,不會(huì )引起由于人體免疫排斥所經(jīng)常發(fā)生的過(guò)敏及發(fā)燒癥狀。
另外,由于沒(méi)有任何動(dòng)物來(lái)源的組分,自然也不會(huì )有任何與此相關(guān)的致病菌或病毒等,比如瘋牛病毒等。
2.從使用便利性來(lái)講
更便利,需要的操作步驟更少。
使用友康間充質(zhì)干細胞無(wú)血清培養基培養MSC,可用干細胞溫和消化酶(同樣是化學(xué)成分限定,無(wú)動(dòng)物源組分)進(jìn)行消化,且在消化后不需要終止消化(傳統做法一般用血清培養基或血清終止消化),用 PBS 直接稀釋離心去除即可。
更少的操作,意味著(zhù)更少的工作量以及更低的污染概率。
3.從干細胞產(chǎn)量來(lái)講
MSC 的產(chǎn)量(擴增倍數)高于血清。
在 MSC 培養基中培養所得的干細胞數量,不僅取決于培養基可以提供的營(yíng)養組分,而且受細胞是否分化的極大影響。
第3代MSC 無(wú)血清培養基充分利用近幾年的科研成果,特別是干細胞分化與衰老機制的研究,通過(guò)組分的調整能夠可以更好的抑制細胞的分化。
從細胞數量來(lái)講,一般一根 20CM 的臍帶,可以得到原代細胞的數量為 1E7。前三代的擴增倍數均在 10 倍以上。(接種密度 8000 cells/cm2)。
而血清培養基,由于其來(lái)源于動(dòng)物血液,所以既有抑制干細胞分化的組分,也有促進(jìn)干細胞分化的組分,沒(méi)有辦法人工選擇。
比如,血清中含有葡萄糖,再加上培養基里的糖,總含量就比較高了,高濃度糖易促衰老和分化;另外血清中一般均含有外泌體,是細胞分泌的一種囊泡結構,里面含有調節細胞生長(cháng)和分化的物質(zhì),不同血清中這些物質(zhì)的比例不一樣,所以也易導致分化;血清中含有代謝廢物,這些物質(zhì)一般對細胞均有損害,易導致衰老和分化。
另外,目前很多用戶(hù)一般使用帶酚紅的培養基,酚紅作為常見(jiàn)的激素成分,對干細胞的生長(cháng)有著(zhù)明顯的誘導分化的作用。
事實(shí)上,使用無(wú)血清 MSC 培養基的細胞產(chǎn)量高,是目前中國客戶(hù)大量該換為無(wú)血清培養基的主要原因。而非安全性。
4.從細胞質(zhì)量來(lái)講(形態(tài)、活性、干性及表型)
從鏡下看,無(wú)血清 MSC 培養的干細胞形態(tài)短小,呈標準立體梭形,細胞邊緣清晰,透亮。這是細胞更少衰老與分化的直觀(guān)表征。
相比來(lái)說(shuō)血清培養基培養出來(lái)的 MSC 細胞,細胞形態(tài)扁平,體積更大,邊緣不清晰。
血清培養基成分復雜,含有很多促進(jìn)分化的物質(zhì),細胞易發(fā)生自發(fā)分化,因而細胞失去干性。另外,在體外定向分化時(shí),易有培養基殘留,會(huì )干擾定向分化。
但無(wú)血清培養基配方明確,各物質(zhì)的量一定,不含干擾組分,細胞不易發(fā)生自發(fā)分化,干性維持較好,即使有殘留,也不會(huì )干擾定向分化。
MSC 無(wú)血清培養基的表型,更為符合 MSC 細胞的定義。
5.從使用成本來(lái)講
使用 MSC 無(wú)血清培養基,成本傾向于越來(lái)越低。
無(wú)血清培養基,其每一種組分都是人工合成的。包括氨基酸、無(wú)機鹽、重組蛋白等。隨著(zhù)技術(shù)進(jìn)步與產(chǎn)能擴大,所有人工制造的組分的生產(chǎn)成本均會(huì )大幅下降。
特別是隨著(zhù)培養基研發(fā)企業(yè)不斷的改進(jìn)產(chǎn)品,比如通過(guò)配方優(yōu)化,不斷降低昂貴的重組蛋白的使用量,干細胞培養基也在逐步向著(zhù)*化學(xué)成分限定培養基發(fā)展(CD 培養基),CD 培養基不含昂貴的重組蛋白,成本自然會(huì )大幅下降。
從用戶(hù)角度講,特別是干細胞藥物企業(yè)而言,選擇血清培養基或無(wú)血清培養基就是核心生產(chǎn)工藝的選擇。一旦選擇,以后極難更改。所以他們更傾向于選擇以后成本會(huì )越來(lái)越低的無(wú)血清培養基。
6.從干細胞藥物申報角度來(lái)講
由于無(wú)血清培養基有著(zhù)明確的產(chǎn)品配方,因此,監管機構要求的關(guān)于細胞殘留培養基組分的安全性驗證的工作非常容易完成。
由于血清培養基,血清中已知組分有 150 多種,還有多種未知組分,細胞制品中的培養基殘留安全性驗證工作,極難完成,如果不說(shuō)不可能的話(huà)。
7.從控制干細胞分泌因子角度來(lái)說(shuō)
無(wú)血清培養基由于全組分都是人工添加的,因此,可以很方便的通過(guò)調節一些組分,來(lái)調節干細胞分泌的蛋白的含量。比如干細胞分泌的 PEG2,MSC 無(wú)血清培養基可以極為方便的通過(guò)調整不同組分的對比,大幅提高 PEG2 的表達。當然,其他涉及干細胞制成品的分泌的細胞因子的表達量均可通過(guò) MSC 無(wú)血清培養基配方的調整得已實(shí)現。
8.從細胞衰老角度來(lái)說(shuō)
無(wú)血清培養基當然不會(huì )添加會(huì )加速細胞衰老的物質(zhì)。
而血清培養基中的血清組分很復雜,有 150 多種已知組分組分,多種未知組分。這些組分中,有些對細胞生長(cháng)是有利的,有些對細胞生長(cháng)是無(wú)作用的,有些對細胞生長(cháng)反而是有害的。研究表明過(guò)氧化氫誘導后的MSCs 出現衰老特征,在體外培養時(shí),這些活性氧(ROS)通過(guò)氧化 DNA、蛋白質(zhì)等生物大分子對細胞造成傷害,加速細胞的衰老。干細胞對微環(huán)境中 ROS 的累積水平特別敏感,而血清中含有 ROS,可能會(huì )導致細胞內 ROS 大量聚集而引起細胞出現應激誘導的早熟性衰老。
9.從性能穩定性來(lái)說(shuō)
無(wú)血清培養基有明確的配方,因此,批間差極小,近乎沒(méi)有。
而血清來(lái)自不同個(gè)體的牛,由于牛的體質(zhì)不同,其血清中各種組分的差異很大。比如血清中的 EGF,有的含量為 10ug/ml,有的僅為 2ug/ml,相差了 5 倍。不同品牌間,甚至同品牌產(chǎn)品批次差別可能很大。培養效果沒(méi)有保證。