(1)定時(shí)法:(兩點(diǎn)法)
通過(guò)測定酶反應開(kāi)始后某一時(shí)間段內(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來(lái)求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開(kāi)始的時(shí)間。
酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間,通過(guò)加入強酸、強堿、蛋白醫學(xué)教育網(wǎng)整理沉淀劑等,使反應停止(也叫中止反應法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。
該法最基本的一點(diǎn)是停止反應后才測定底物或物的變化。
優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)單易行,對試劑要求不高。
缺點(diǎn):難保證測定結果的真實(shí)性。
難以確定反應時(shí)間段酶促反應是否處于線(xiàn)性期。隨著(zhù)保溫時(shí)間的延續,酶變性失活加速。
(2)連續監測法:
又稱(chēng)為動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續反應法。
在酶反應過(guò)程中,用儀器監測某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過(guò)計算求出酶反應初速度。
連續監測法根據連續測得的數據,可選擇線(xiàn)性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。
因此連續監測法測定酶活性比定時(shí)法更準確。
實(shí)際工作中,采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫學(xué)教育網(wǎng)整理應用、最頻繁測酶活性濃度的方法。
(3)平衡法:
通過(guò)測定酶反應開(kāi)始至反應達到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來(lái)求出酶活力的方法,又叫終點(diǎn)法。