一、囊泡形成的機制
當脂質(zhì)薄膜或脂質(zhì)結塊發(fā)生水合并且堆疊的液晶態(tài)雙層膜變得具有流動(dòng)性和膨脹時(shí)，會(huì )形成脂質(zhì)體（脂質(zhì)囊泡）。水合的脂質(zhì)層在攪拌期間分離并自我密合形成龐大的多層囊泡（LMV），LMV可防止水與雙層膜的碳氫化合物核心在邊緣發(fā)生相互作用。一旦形成這些顆粒，將需要聲能（超聲）或機械能（擠出）形式的能量輸入才能減小粒徑。

二、脂質(zhì)體制備方法
脂質(zhì)配方的性質(zhì)取決于具體成分（陽(yáng)離子、陰離子和中性脂質(zhì)）。但是，同一種制備方法適用于所有成分的脂質(zhì)囊泡。制備流程的一般要素包括制備用于水合的脂質(zhì)、攪拌水合以及減小粒徑，從而獲得均勻分布的囊泡。

A. 制備用于水合的脂質(zhì)
當用混合脂質(zhì)成分制備脂質(zhì)體時(shí)，必須先溶解脂質(zhì)并混合于有機溶劑中，以確保獲得均勻的脂質(zhì)混合物。通常，該過(guò)程使用氯/仿或氯/仿:甲醇混合液完成。目的在于使脂質(zhì)混合，獲得澄清的脂質(zhì)溶液。一般情況下，脂質(zhì)溶液的制備濃度為10-20mg脂質(zhì)/ml有機溶劑，但是，在脂質(zhì)溶解度和混合程度可接受的情況下，也可使用更高濃度。一旦脂質(zhì)充分混合于有機溶劑中，則除去溶劑以產(chǎn)生脂質(zhì)薄膜。如有機溶劑較少（< 1mL），可在通風(fēng)櫥內使用干燥氮氣流或氬氣流蒸發(fā)溶劑。如有機溶劑較多，應通過(guò)旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑，從而在圓底燒瓶?jì)缺谛纬芍|(zhì)薄膜。將樣品瓶或燒瓶放在真空泵上過(guò)夜，去除殘留有機溶劑，使脂質(zhì)薄膜干燥。如果對使用氯/仿有異議，也可以選擇使用叔丁/醇或環(huán)己/烷溶解脂質(zhì)。將脂質(zhì)溶液轉移到容器中，并將容器放在干冰塊上或在干冰-丙酮或酒精（乙醇或甲醇）浴中旋轉，使其凍結。使用酒精浴時(shí)，應確認容器能夠承受突然的溫度變化而不發(fā)生破裂。隨后，將凍結的脂質(zhì)結塊放到真空泵上凍干，直至干燥（1-3天，具體取決于溶劑體積）。脂質(zhì)結塊的厚度不應超過(guò)凍干容器的直徑。干燥的脂質(zhì)薄膜或結塊可從真空泵上取下，將容器牢固密封并冷凍儲存，直至用于水合。

B. 脂質(zhì)薄膜/結塊的水合
只需在干燥脂質(zhì)的容器中加入水介質(zhì)并攪拌，即可完成干燥脂質(zhì)薄膜/結塊的水合。水合介質(zhì)的溫度應高于脂質(zhì)的凝膠-液晶相轉變溫度（Tc或Tm），在加入到干燥脂質(zhì)中之前具有最高Tc。加入水合介質(zhì)后，脂質(zhì)懸浮液溫度在水合期間應保持在Tc以上。對于高轉變溫度的脂質(zhì)，只需將脂質(zhì)懸浮液轉移到圓底燒瓶中，并將燒瓶放在無(wú)真空抽吸的旋轉蒸發(fā)系統上。在溫度始終高于脂質(zhì)懸浮液Tc的溫水浴上旋轉圓底燒瓶，可使脂質(zhì)在充分攪拌的流動(dòng)狀態(tài)下發(fā)生水合。水合時(shí)間取決于脂質(zhì)種類(lèi)和結構，但是，強烈建議在劇烈振蕩、混合或攪拌條件下水合1小時(shí)。此外，在減小粒徑之前將囊泡懸浮液靜置過(guò)夜（老化），可以簡(jiǎn)化減小粒徑過(guò)程并提高粒徑分布的均勻度。不建議對高轉變溫度的脂質(zhì)進(jìn)行老化處理，因為脂質(zhì)的水解會(huì )隨溫度升高而增加。

水合介質(zhì)通常由脂質(zhì)囊泡的應用決定。合適的水合介質(zhì)包括蒸餾水、緩沖液、生理鹽水和非電解質(zhì)溶液，如糖溶液。建議體內應用采用生理滲透壓（290 mOsm/kg）。滿(mǎn)足這些條件的普遍接受的溶液為0.9%生理鹽水、5%葡萄糖和10%蔗糖溶液。在水合期間，一些脂質(zhì)將形成結構的復合物。當使用低離子強度溶液水合時(shí)，可觀(guān)察到高電荷脂質(zhì)形成粘性膠體?？s略圖：通過(guò)添加鹽或減小脂質(zhì)懸浮顆粒的粒徑，可緩解這個(gè)問(wèn)題。磷脂酰乙醇/胺等水合較差的脂質(zhì)傾向于在水合中自我聚集。脂質(zhì)囊泡包含超過(guò)60 mol%磷脂酰乙醇/胺，可形成在囊泡周?chē)幸恍铀蠈拥念w粒。隨著(zhù)顆粒相互靠近，阻擋顆?？拷乃吓懦庾饔孟?，兩層膜形成能量井，進(jìn)而粘附并形成聚集物。聚集物從溶液中沉淀出來(lái)并形成龐大的絮狀物，通過(guò)攪拌可使其分散，但靜置后將重新聚集。水合產(chǎn)物是一種龐大的多層囊泡（LMV），結構與洋蔥類(lèi)似，每個(gè)脂質(zhì)雙分子層均被水層分離。脂質(zhì)層之間的空間由多水合層成分填充，其比由靜電排斥力分離的高電荷層靠得更近。一旦產(chǎn)生了穩定的水合LMV懸浮液，即可通過(guò)多種技術(shù)減小粒徑，包括超聲法或擠出法。

C. 減小脂質(zhì)懸浮顆粒的粒徑
1. 超聲法
利用聲能（超聲法）破壞LMV懸浮顆粒，通?？僧a(chǎn)生較小的單層囊泡（SUV），直徑范圍為15-50nm。最常見(jiàn)的超聲顆粒制備儀器是水浴超聲儀和探頭超聲儀。杯-角型超聲儀盡管不常用，但已成功制備SUV。探頭超聲儀可向脂質(zhì)懸浮顆粒傳輸高能量，但會(huì )對脂質(zhì)懸浮顆粒過(guò)度加熱，導致降解。超聲探頭會(huì )向脂質(zhì)懸浮顆粒中釋放鈦顆粒，使用前必須通過(guò)離心將其去除。因此，水浴超聲儀是SUV制備儀器。通過(guò)將裝有懸浮液的試管放到水浴超聲儀中（或將超聲探頭放到試管中），在超過(guò)脂質(zhì)Tc的溫度條件下超聲5-10分鐘，即可完成對LMV分散系統的超聲處理。脂質(zhì)懸浮液應形成稍渾濁的透明溶液。渾濁是由懸浮液的殘留大顆粒誘導光散射造成的。通過(guò)離心可去除這些顆粒，從而獲得澄清的SUV懸浮液。平均粒徑和分布將受到成分和濃度、溫度、超聲時(shí)間和功率、體積和超聲儀調諧的影響。由于超聲條件幾乎不可能復制，因此，不同時(shí)間產(chǎn)生的不同批次通常具有粒徑差異。此外，由于這些膜高度彎曲，因此，SUV本身并不穩定，當儲存在低于其相轉變溫度的環(huán)境中時(shí)，將自發(fā)融合形成大型囊泡。

2.擠出法
脂質(zhì)擠出法通過(guò)用力擠壓脂質(zhì)懸浮液，使其通過(guò)孔徑的聚碳酸酯濾膜，從而產(chǎn)生粒徑與所用濾膜孔徑相近的顆粒。在擠壓通過(guò)最終孔徑濾膜之前，可通過(guò)多次凍融循環(huán)或使用較大孔徑濾膜（通常為0.2µm-1.0µm）預先過(guò)濾懸浮液，使LMV懸浮顆粒破碎。該方法有助于防止膜污染并提高最終所得懸浮液的粒徑分布均一性。與所有減小LMV分散系統粒徑的方法相同，擠出法采用的溫度應高于脂質(zhì)的Tc。若擠出溫度低于Tc，則濾膜可能會(huì )被無(wú)法通過(guò)膜孔的硬質(zhì)膜堵塞，導致擠出失敗。使用孔徑為100nm的濾膜擠出，通?？僧a(chǎn)生較大的單層囊泡（LUV），平均孔徑為120-140nm。平均粒徑還取決于脂質(zhì)成分，并且具有非常高的批次間重現性。