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細胞培養常見(jiàn)問(wèn)題及其解決方法
  • 發(fā)布日期:2021-01-12      瀏覽次數:1248
    • 1.如何正確地保存培養基?
      普通的培養基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已開(kāi)封建議3周內使用。未開(kāi)封的培養基,一般可穩定保存1年。

      2.培養基中酚紅的作用是什么?導致培養基顏色變化的原因有哪些?
      酚紅在培養基中被用來(lái)作為pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。
      培養基顏色變黃,原因有:培養基中細胞代謝產(chǎn)物為酸性,培養瓶受污染,細菌代謝產(chǎn)酸等導致。
      培養基顏色偏暗紅色,原因有:培養基保存在4℃冰箱中,培養基內的二氧化碳逐漸溢出,造成培養基越來(lái)越偏堿性,而培養基中的酸堿指示劑酚紅會(huì )隨著(zhù)堿性增加而更偏暗紅。

      3.培養基污染了,這要怎么進(jìn)行測試呢?
      取0.1ml液體培養基涂布到無(wú)菌蛋白棟牛肉gao培養基上37℃培養24h,觀(guān)察有無(wú)雜菌生長(cháng)(肉眼即可觀(guān)察到)。

      4.培養基中添加了血清和抗生素后,可長(cháng)期保存嗎?
      一旦培養基中添加了血清和抗生素,建議避光保存在4℃冰箱且在2周內用完。因為一些抗生素和血清的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解了。

      5.培養基有沉淀,是怎么回事?怎么預防處理沉淀?
      首先判斷培養基是否已經(jīng)污染,其次,若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的,此沉淀對細胞培養無(wú)影響。若沉淀為結晶,有可能是因為向培養基里加入的輔助試劑降低了培養基的溶解度,使一些無(wú)機鹽析出。
      可應用離心、過(guò)濾的方法去除這些沉淀,盡可能地減少血清凍融次數。

      6.在什么情況下可以使用不加酚紅的培養基呢?
      研究表明,酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類(lèi)反應,培養細胞時(shí),用不加酚紅的培養基;一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí),為了避免酚紅干擾檢測,也使用不加酚紅的培養基。

      7.為什么培養基中會(huì )含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉,它們的作用是什么?
      L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養細胞的能量來(lái)源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà),細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
       

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