什么是細胞培養？

有哪三種細胞培養？

細胞培養的條件是什么？

細胞培養的具體步驟是什么？

定義:細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養條件等），使之生存、生長(cháng)、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細胞培養都是一個(gè)*的過(guò)程，細胞培養本身就是細胞的大規?？寺?。細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)*的環(huán)節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長(cháng)增殖等。

細胞培養的分類(lèi)：動(dòng)物細胞培養、植物細胞培養、微生物細胞培養

細胞培養的條件：

1．培養基

細胞培養基包含細胞生長(cháng)所需的各種營(yíng)養物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無(wú)機鹽、維生素等。針對不同細胞的營(yíng)養需求，有多種合成培養基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分

在各種合成培養基提供基礎營(yíng)養物質(zhì)之外，還需根據不同細胞和不同的培養目的添加其他成分，如血清、因子等。

血清提供的是細胞外基質(zhì)、生長(cháng)因子和轉鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血清。要根據不同的細胞和不同的研究目的決定添加血清的比例。10%～20%的血清能維持細胞較快的生長(cháng)增殖速度，稱(chēng)為生長(cháng)培養液；為維持細胞緩慢生長(cháng)或不死，添加2%～5%的血清即可，稱(chēng)為維持培養液。但血清中也存在有害于細胞生長(cháng)和繁殖的物質(zhì)，如補體、免疫球蛋白和一些生長(cháng)抑制因子；成分不明確，影響對結果的分析；不同動(dòng)物、不同批次的血清活性差別較大，影響培養效果的穩定性。

谷氨酰胺是細胞生長(cháng)重要的氮源，在細胞生長(cháng)代謝過(guò)程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

細胞培養的具體步驟：

一、細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM*培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM*培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤(pán)中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時(shí)．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱3min。加人1ml DMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤(pán)，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進(jìn)行計數，按照1×105/盤(pán)接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時(shí)，去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱3min。加入lmlDMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤(pán)，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過(guò)夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入液氮，可以保存三個(gè)月。

凍存液的配制：70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。