ELISA試劑盒的應用

ELISA都有哪些類(lèi)型？

一、ELISA是什么？

ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是在免疫酶技術(shù)的基礎上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測定技術(shù) 。

ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetection Ab），形成一個(gè)抗原抗體的復合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標記了，即可用來(lái)直接測定抗原的量，若無(wú)，則可利用另一個(gè)酶標記的二級抗體來(lái)測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate），作用后產(chǎn)生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度

二、ELISA通常分為四種類(lèi)型：直接法、間接法、競爭法、夾心法等

1.直接法（Direct ELISA）僅需要抗原和酶標一抗，操作簡(jiǎn)便，可避免交叉反應，然而該方法要求酶標一抗有較高的特異性要求，同時(shí)也并非所有的一抗適合標記處理。直接法在實(shí)際運用中并不多見(jiàn)，它并不能對樣本中抗體進(jìn)行定量分析，因為樣本中抗體是非酶標抗體，無(wú)法進(jìn)行后續顯色。該法經(jīng)過(guò)改進(jìn)就是競爭法。

2.間接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信號強度，也使抗體的選擇多樣化，然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應。間接法只能用于測定抗體，主要用于疾病的診斷，其優(yōu)點(diǎn)是只需要改變包被抗原，酶標抗體是通用的。

3.夾心法（Sandwich ELISA）分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法：

①雙抗體夾心法中抗原被兩個(gè)抗體——捕捉抗體和檢測抗體，結合于不同位點(diǎn)。捕捉抗體固定于載體上，檢測抗體通過(guò)結合抗原進(jìn)行顯色分析。應用于雙抗體夾心法檢測的抗體需是單抗，而且對同一抗原結合位點(diǎn)不同，如此才能避免交叉反應或兩種抗體競爭性結合同一位點(diǎn)。夾心法具有高靈敏度、高專(zhuān)一性的優(yōu)勢，但該法只適用于有多個(gè)結合位點(diǎn)的抗原檢測，主要用于檢測各種大分子抗原——例如在醫學(xué)檢測中測定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于雙抗體夾心法特異性高，在檢測過(guò)程中有時(shí)會(huì )將樣本和酶標抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應（一步法），此時(shí)如果樣本中抗原含量過(guò)高會(huì )導致其與固相抗體和酶標抗體均有結合而  不形成“夾心復合物”，此時(shí)測出的結果將低于實(shí)際含量甚至是陰性結果（鉤狀效應hook ffect）。因此，如果使用一步法測定樣本中抗原含量時(shí)要注意測量的線(xiàn)性范圍，另外使用高親和力的單抗也可削弱鉤狀效應。

②雙抗原夾心法中抗原被包被于固相，檢測樣本中的抗體結合于抗原后，使用酶標的抗原進(jìn)行結合及后續反應，可以用來(lái)測定樣本中的抗體。雙抗原夾心法的關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，需要根據抗原結構進(jìn)行設計，在醫學(xué)檢驗上測定抗HBsAg抗體采用的就是此法，檢測時(shí)被測樣本不需要稀釋即可直接進(jìn)行測定，故此靈敏度相對而言高于間接法。

4.競爭法（Competitive ELISA）是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標抗體/抗原競爭性結合的分析方法。當游離抗體（或抗原）濃度越高，則能與固定抗原（或抗體）結合的酶標抗體（或抗原）就越少，后續顯色就越淺，即與對照相比，顯色越淺，表示檢測樣本中抗體（或抗原）含量越高。該法適合比較不純的樣本，且重復性好，但是檢測的靈敏度和專(zhuān)一性較差。競爭法測抗體常常用于檢測某些干擾物質(zhì)不易去除的樣本及難以純化得到抗原等情況。競爭法測抗原常用于檢測小分子抗原及半抗原，這類(lèi)抗原通常缺乏兩個(gè)以上的識別位點(diǎn)，不適用于雙抗夾心法進(jìn)行測定。