1、在使用胰酶細胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細菌污染。
2、胰酶細胞消化液消化細胞時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，否則細胞鋪板后生長(cháng)狀況會(huì )較差。
貼壁細胞的消化：
1、吸去培養液，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清
2、加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過(guò)細胞即可，根據胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細胞消化時(shí)間有所不同)
3、顯微鏡下觀(guān)察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái)。
4、此時(shí)吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的*細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實(shí)驗如果發(fā)現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。
如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實(shí)驗。
常用的細胞消化液為胰蛋白酶(Trypsin)，EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)(如細胞外基質(zhì))水解，改變細胞間的連接，使組織或細胞片分散成單個(gè)細胞，制成細胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗。
影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長(cháng)短、是否反復凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等)、消化時(shí)的溫度(氣溫、細胞培養瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等 。
加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多(依培養器皿的大小而定)，以使充分浸潤。
一般消化時(shí)間約為1至3分鐘，肉眼觀(guān)察瓶底由半透明(細胞單層連接成片)轉為透明、點(diǎn)狀(出現細小空隙)時(shí)，棄去細胞消化液，或看見(jiàn)培養瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的*培養液終止消化，吹打分散;如見(jiàn)大量細胞片狀脫落，已消化過(guò)頭，則不能頃倒消化液而直接進(jìn)行下一步操作。(消化過(guò)頭，可造成大量細胞從瓶壁上脫下，甚至造成細胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入*培養基可以終止反應。
