一、爬片的準備

1.爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片；

2.應用蓋玻片，可根據自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪時(shí)可用前護士輸液用于打開(kāi)玻璃安瓶的小沙輪，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后，稍用力一掰就分開(kāi)了。

如果接種大皿的話(huà)，我一般不將蓋玻片切開(kāi)，直接清潔后放入培養皿中，到染色時(shí)再將之切開(kāi)，這樣既保證了細胞均一性，又可同時(shí)做幾個(gè)指標的染色。

3.將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜，第二天先用自來(lái)水沖洗20遍，再置于無(wú)水酒清中浸泡6小時(shí)，再用三蒸水沖洗3遍，放在飯盒或者玻璃培養皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。

4.高壓后取出放入烤箱中烤干，備用?？靖珊罂煞湃氤瑑襞_中。

5.關(guān)于多聚賴(lài)氨酸，很多人都將玻片用此處理，以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時(shí)從來(lái)沒(méi)用過(guò)多聚賴(lài)氨酸，細胞貼壁仍然很好，且在做后續的免疫細胞化學(xué)染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過(guò)片。

二、細胞爬片 

1.胰酶消化細胞后計數重懸細胞于*培養基中。

2.加細胞時(shí)，根據玻片的大小，先在每個(gè)孔里準備放爬片的位置滴少量培養基，目的是使玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細胞懸液時(shí)玻片漂起，造成雙層細胞貼片。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。

3.根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可

4.待細胞貼壁后，可去上清加含藥培養基。

5.按照實(shí)驗設計，作用一定時(shí)間后取玻片。取玻片時(shí)由于玻片與培養皿底結合較緊，張力較大，我一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗的話(huà)，將所需數量的爬片取出時(shí)應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著(zhù)繼續培養。

三、細胞爬片的固定

細胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。當然，根據研究目的，PBS洗也不是一定要做的，比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗，因為凋亡的細胞在洗的過(guò)程中有可能會(huì )脫落。

另外在保存細胞爬片的時(shí)候，我一般用培養皿或板，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片，這樣方便做實(shí)驗時(shí)取片。然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標記，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個(gè)月的片子做免疫組化是沒(méi)有問(wèn)題的。