1.細胞吸除培育瓶?jì)扰f培育液。

2.參加無(wú)菌pbs洗液（5-8mL）悄悄潤濕細胞，稀釋多余的培育基，之后吸走洗液，動(dòng)作要輕，不可吹打到細胞。

3.向瓶?jì)葏⒓雍?.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許，以能覆滿(mǎn)瓶底為限。 

4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現細胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大后，細胞變圓，比較松動(dòng)后，當即終止消化。
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5.參加該細胞對應的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）終止消化。

6.用吸管通過(guò)吸取的培育基悄悄反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時(shí)應盡量以少的次數將細胞從壁上吹下，不只要操控吹打的力度、次數，還要留意要將細胞盡可能吹成單個(gè)。這樣既能削減死細胞，又能便于細胞再次均勻貼壁成長(cháng)。

7.依據傳代份額，將細胞懸液分瓶，再補充培育基后，靜置于溫箱培育，直止貼壁。

貼壁細胞在培育瓶長(cháng)成致密單層后，持續成長(cháng)的空間缺乏，培育基中的養分成份也耗費較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培育，對細胞進(jìn)行傳代擴增。關(guān)于貼壁不太緊的細胞如293，能夠直接吹散后分瓶。而關(guān)于貼壁較緊的細胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

關(guān)于懸浮細胞換液時(shí)只需要補液就行。

懸浮細胞的傳代則不需要用胰酶消化，直接通過(guò)計數算好傳代的份額，直接分瓶，補液。有些懸浮細胞趨于成團成長(cháng)，此刻細胞成長(cháng)狀態(tài)杰出，當補液時(shí)，防止吹打。