胎牛血清是通過(guò)母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采血獲得的新鮮胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,后經(jīng)生產(chǎn)使用多級高置流膜過(guò)濾技術(shù)和三級0.1?m終端微濾方法處理后,常用于細胞培養相關(guān)實(shí)驗。
胎牛血清是細胞培養中常用的天然培養基,因為胎牛未進(jìn)食過(guò)母乳,所以IgG含量低,且含有豐富的細胞生長(cháng)必須的營(yíng)養成份,故目前多數實(shí)驗人員選擇的都是胎牛血清進(jìn)行動(dòng)物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數生長(cháng)的激素,基礎培養基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養物,以及主要的低分子營(yíng)養物。
2. 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質(zhì)活力。
3. 有些情況下結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合,起到解毒作用。
4. 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5. 起酸堿度緩沖液作用。
6. 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
非正規胎牛血清的產(chǎn)品會(huì )存在很多的問(wèn)題:
1)疫區來(lái)源,無(wú)合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學(xué)污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲(chóng)等,會(huì )直接影響實(shí)驗的結果和穩定。
2)采血工藝不規范,導致采集的原血放置時(shí)間過(guò)長(cháng)或操作不當導致溶血,血液中血細胞裂解,胎牛血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內產(chǎn)物,里面很多物質(zhì)都會(huì )對細胞有刺激作用,影響實(shí)驗的穩定性和數據的真實(shí)性。
3)血清批次不穩定,添加來(lái)補?
很多不法商販拿到低廉的疫區原料血清進(jìn)行加工生產(chǎn),為了保障血清的培養效果會(huì )對血清進(jìn)行處理,較常見(jiàn)的是添加激素、轉鐵蛋白、BSA、生長(cháng)因子等,還有的會(huì )和新生牛血清、培養基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類(lèi)操作對所有生物學(xué)實(shí)驗都有巨大的影響。
不管是國外還是國內血清生產(chǎn)標準都要求不得添加任何外源成分,以前某品牌就有前車(chē)之鑒,他們在血清中加入大量細胞因子和生長(cháng)因子,導致細胞瘋長(cháng),但是做細胞功能性實(shí)驗,結果卻慘不忍睹。目前該品牌已經(jīng)被取締,但這種情況在非正規渠道胎牛血清身上屢禁不止。