胰酶HyClone是一種自豬胰中提取的多種酶的混合物，主要為胰蛋白酶(將蛋白質(zhì)消化成蛋白胨)、胰淀粉酶(將淀粉消化成糖)與胰脂肪酶(將脂肪消化成甘油和脂肪酸)。其通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細胞間結合處蛋白降解，這時(shí)細胞由于自身內部細胞骨架的張力作用下成為球形，從而使細胞分開(kāi)。

　　不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為8.0、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力zui強。使用胰酶時(shí)，應把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如:D-Hanks液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。

　　胰酶HyClone使用注意

　　1.在使用胰酶細胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細菌、支原體污染。

　　2.胰酶細胞消化液消化細胞時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，過(guò)長(cháng)會(huì )損傷細胞，導致細胞鋪板后生長(cháng)狀況較差。

　　貼壁細胞的消化

　　1.吸去培養液，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的死細胞/血清。

　　2.加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過(guò)細胞即可，根據胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量，室溫放置2-5分鐘(不同的細胞消化時(shí)間有所不同)。

　　3.顯微鏡下觀(guān)察，細胞明顯皺縮成圓形，并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者在瓶壁上有部分成點(diǎn)狀區域細胞脫落;或者用手拍打克氏瓶正好能夠使細胞脫落;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái)。

　　4.此時(shí)加入含血清的*細胞培養液停止消化，吹打下細胞，即可直接用于后續實(shí)驗;如果發(fā)現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。鈣離子、鎂離子和血清蛋白的存在會(huì )降低胰酶活力。因此，胰酶HyClone溶液常用無(wú)Ca2+、Mg2+的D-Hanks’平衡鹽溶液配制成0.25%溶液。消化細胞時(shí)，加入一些血清或含血清的培養液，或胰蛋白酶抑制劑能終止胰蛋白酶對細胞的消化作用。