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細胞凋亡檢測實(shí)驗原理
  • 發(fā)布日期:2024-04-25      瀏覽次數:167
    • 細胞死亡根據其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區分為凋亡和壞死兩種不同類(lèi)型。

      凋亡普遍存在于生命界,在生物個(gè)體和生存中起著(zhù)非常重要的作用。

      它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合,是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過(guò)程。

      細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。

      在形態(tài)上可見(jiàn)凋亡細胞與周?chē)毎撾x接觸,細胞變園,細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月?tīng)罘植?、內質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進(jìn)一步融合將細胞分成多個(gè)完整包裹的凋亡小體,凋亡小體最后被吞噬細胞吞噬消化。

      在凋亡過(guò)程中細胞內容物并不釋放到細胞外,不會(huì )影響其它細胞,因而不引起炎癥反應。

       

      在生物化學(xué)上,多數細胞凋亡的過(guò)程中,內源性核酸內切酶活化,活性增加。

      核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷,降解為180-200bp或它的整倍數的各種片斷。

      如果對核DNA進(jìn)行瓊脂糖電泳,可顯示以180-200bp為基數的DNA ladder的特征。

       

      相比之下,壞死是細胞處于劇烈損傷條件下發(fā)生的細胞死亡。細胞在壞死早期即喪失質(zhì)膜完整性,各種細胞器膨脹,進(jìn)而質(zhì)膜崩解釋放出其中的內容物,引起炎癥反應,壞死過(guò)程中細胞核DNA雖也降解,但由于存在各種長(cháng)度不等的DNA片斷,不能形成梯狀帶紋,而呈彌散狀。

      一些溫和的損傷刺激及一些抗腫瘤藥物可誘導細胞凋亡,通常這些因素在誘導凋亡的同時(shí),也可產(chǎn)生細胞壞死,這取決于損傷的劇烈程度和細胞本身對刺激的敏感程度。

       

      細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜。

      當細胞壞死時(shí),質(zhì)膜不完整,PI就進(jìn)入細胞內部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著(zhù)色,凋亡細胞和活細胞不著(zhù)色。

      而一些活細胞染料由于為親脂性物質(zhì),可跨膜進(jìn)入活細胞,因而可進(jìn)行活細胞染色。


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