原代細胞培養成功以后，需要進(jìn)行分離培養，否則細胞會(huì )因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養障礙影響細胞生長(cháng)。細胞由原培養瓶?jì)确蛛x稀釋后傳到新的培養瓶中培養的過(guò)程稱(chēng)之為傳代培養。
傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進(jìn)行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。
傳代細胞形成細胞株的最大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗材料，便于實(shí)驗。

操作步驟：
（1）吸掉或倒掉培養瓶?jì)扰f培養液。
（2）向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌敢汉虴DTA混合液少量，以能覆蓋培養瓶底為宜。
（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，當發(fā)現胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。
（4）吸出消化液，向瓶?jì)燃尤際anks液少量，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。
（5）使用彎頭吸管，吸取瓶?jì)扰囵B液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細胞。
（6）用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進(jìn)行培養。
（7）細胞培養換液時(shí)間應根據細胞生長(cháng)的狀態(tài)和實(shí)驗要求來(lái)確定。一般2～3d后應換一次生長(cháng)液。待細胞鋪滿(mǎn)器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。

注意事項：
（1）掌握好細胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(cháng)的消化會(huì )導致細胞脫落、損傷。
（2）掌握好消化濃度，當消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應縮短，過(guò)低時(shí)細胞消化時(shí)間相對延長(cháng)。