所需材料：裝有75%醫用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、含血清培養基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸，以及擁有基礎設施的細胞間。

操作步驟：
1.紫外照射滅菌后，我們應該穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。
2.從培養箱取出細胞培養瓶（一般選擇處于對數期的細胞），用酒精噴壺在培養瓶表面噴灑75%酒精消毒，轉移培養瓶到超凈臺。
3.打開(kāi)蓋子，輕輕吸出舊的培養液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次（注意從側壁加入，以免沖掉細胞），棄去PBS緩沖液。
4.可用移液器加入1-2ml胰酶（具體量根據實(shí)驗需要確定，此處僅為參考用量），“十字"晃動(dòng)，使胰酶充分接觸細胞。
5.將加入胰酶的細胞培養瓶轉移到倒置顯微鏡載物臺，鏡下觀(guān)察細胞消化情況，當細胞變圓且大量脫落時(shí)，準備終止消化，用75%的酒精噴灑培養瓶表面，轉移到超凈臺。
6.用移液器（或巴氏吸管）加入等量含血清培養基，終止消化。移液器（或巴氏吸管）充分吹打（動(dòng)作也不要太猛，畢竟細胞也是蠻脆弱的），使細胞能夠脫落。
7.將培養瓶中混合液體轉移至離心管中（離心管規格根據實(shí)驗需要確定），配平，離心5分鐘左右（離心機轉速根據細胞種類(lèi)而定，常見(jiàn)的有1000rpm/min）。
8.離心好后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉移進(jìn)超凈臺，打開(kāi)蓋子，將上清液倒入廢液缸。
9.加入適量體積含血清培養基，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打，制成細胞懸液。
10.將細胞懸液分裝進(jìn)2個(gè)（或多個(gè)）潔凈滅菌培養瓶，加入適量培養基，蓋好蓋子將分裝好的培養瓶置于倒置顯微鏡載物臺，觀(guān)察細胞情況，細胞應保證一定數量，數量太少會(huì )影響生長(cháng)情況。
11.在培養瓶上做標記，注明傳代時(shí)間，細胞種類(lèi)，操作人員等信息。在放入培養箱之前應再次用酒精噴一噴培養瓶表面，然后應記得整理操作臺，用75%酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。