產(chǎn)品說(shuō)明:
在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細胞懸液)以及傳代細胞培養中,貼壁生長(cháng)細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)(如細胞外基質(zhì))水解,使組織或貼壁細胞分散成單個(gè)細胞,制成細胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗。
胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和0.02%EDTA(0.53mM),溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,經(jīng)過(guò)濾除菌,可以直接用于培養細胞和組織的消化。胰蛋白酶-EDTA消化液具有方便快速、穩定安全、細胞狀態(tài)好等特點(diǎn)。通常室溫消化2分鐘左右就可以消化下大多數貼壁細胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚紅和不含酚紅2類(lèi)產(chǎn)品,酚紅具有pH 指示作用。
使用方法:
1. 貼壁細胞的消化:
a) 吸去培養液,用無(wú)菌的PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA消化液,蓋過(guò)細胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時(shí)間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當延長(cháng)消化時(shí)間。
c) 顯微鏡下觀(guān)察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀(guān)察培養器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的規格100ml 100ml 備注不含酚紅含酚紅
變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來(lái)。此時(shí)吸除消化液。加入含血清的細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實(shí)驗。
d) 如果發(fā)現消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA消化液重新消化。
e) 如果發(fā)現細胞消化時(shí)間過(guò)長(cháng),未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實(shí)驗。
2. 組織的消化:
不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項:
1.由于組織或細胞性質(zhì)不同,實(shí)驗人員應依據具體情況,確定最佳消化時(shí)間;消化細胞時(shí)間不宜過(guò)長(cháng),否則會(huì )影響細胞貼壁和生長(cháng)狀況;
2.本產(chǎn)品不含抑菌劑,在使用過(guò)程中要特別注意無(wú)菌操作,避免消化液被微生物污染;
3.不宜4℃長(cháng)期保存,切忌反復凍融,小量使用時(shí)建議分裝凍存;
4.為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。