該酶是糖酵解反應中的一個(gè)酶,由4個(gè)30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa。該酶基因為管家(house keeping)基因,幾乎在所有組織中都高水平表達,在同種細胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達量一般是恒定的,且不受含有的部分識別位點(diǎn)、佛波脂等的誘導物質(zhì)的影響而保持恒定,故被廣泛用作抽提total RNA,poly(A)+ RNA,Western blot等實(shí)驗操作的標準化的內參。常用的內參有,ACTB(β-actin、β-肌動(dòng)蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一、各孔間的溫差等所造成的誤差、這些都是管家基因,在各個(gè)組織中的表達量相對穩定,其中18S同整個(gè)基因譜有關(guān)(負責裝配),它在總RNA中占的比例最高。
轉染了GAPDH相關(guān)siRNA的HeLa細胞在轉染后48小時(shí)后不斷增殖。 紅:被標記的siRNA;藍:被染色的細胞核;綠色:GAPDH蛋白。
陰性對照(scrambled siRNA)的導入(左)對GAPDH蛋白的表達沒(méi)有影響,不過(guò)若轉入一個(gè)以GAPDH(右)為靶標的siRNA,則會(huì )導致GAPDH蛋白表達水平的急劇下降。