使用方法

一、儲存液和工作液制備

1）儲存液制備：用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II凍干粉，配制成10mg/ml的儲存液，用0.22µM濾膜過(guò)濾除菌。本儲存液置于2-8℃，2周穩定；根據單次用量分裝凍存，高達2個(gè)月穩定，避免反復凍融。

2）工作液制備：使用時(shí)用合適的細胞培養液將儲存液稀釋到工作液濃度即可，常用工作濃度為0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工作濃度。具體使用濃度請根據自身實(shí)驗體系或參考文獻來(lái)調整。

二、組織分離

1）用無(wú)菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm小片，之后用無(wú)菌PBS緩沖液清洗組織片幾次；

2）用Dispase II工作液（0.6-2.4 U/ml）浸沒(méi)并37℃孵育進(jìn)行組織解離；

3）置于水平搖床上，低速轉動(dòng)，37℃孵育直至組織 完/全 解離；【注意】：第一次使用Dispase II，通過(guò)細胞計數來(lái)確定總反應時(shí)間。對于堅硬致密組織需要1h的孵育時(shí)間，不過(guò)孵育時(shí)間幾小時(shí)也不會(huì )有副作用。

4）若有需要，將消化產(chǎn)物用無(wú)菌不銹鋼網(wǎng)過(guò)篩，從而分離解散細胞和殘留組織，或當更大片段組織靜置到管底，輕輕倒出上層細胞。若需要進(jìn)一步解離，則加入新鮮的Dispase II工作液到殘留組織。

5）低速離心收集細胞，吸掉酶工作液；

6）用適當的細胞培養液重懸細胞，置于正常預優(yōu)化條件下培養。

三、細胞亞培養

1）用37℃預熱的Dispase II工作液完/全覆蓋細胞，置于37℃孵育5min；

2）吸掉溶液，于37℃再孵育10min；

3）顯微鏡觀(guān)察以確定消化情況，若有需要，可再孵育15min；

4）用細胞培養液重懸細胞，低速離心并用培養基清洗細胞幾次；

5）用新鮮細胞培養液重懸細胞；

6）按照常規方法進(jìn)行分盤(pán)傳代。

注意事項

1）Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注冊商標。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。