BI胎牛血清組份的復雜性及作用機理的關(guān)聯(lián)性,使得人工無(wú)血清培養基添加物想要模擬胎牛血清組份的作用就難上加難了。但隨著(zhù)細胞生物學(xué)及發(fā)酵制藥工業(yè)的發(fā)展,成本及潔凈程度的要求下,勢必會(huì )有新的人工替代試劑出現,而這需要我們科研人員的共同努力。
BI胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題總結:
問(wèn):加到培養基中的BI牛血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實(shí)驗了。
問(wèn):BI胎牛血清(Bioind胎牛血清)滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長(cháng)因子。 但是如果用于培養一些表面具有補體受體的細胞,如內皮細胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。
問(wèn):我要做滋養細胞培養,胎牛血清要滅活嗎?
答:進(jìn)口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
問(wèn):我用病毒上清轉染細胞,培養用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會(huì )影 響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會(huì )和病毒相結合,影響轉染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞, 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養基加病毒孵育幾小時(shí),目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無(wú)血清培養基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結合過(guò)程的干擾,一般是2-6小時(shí),根據細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活 !這要根據實(shí)際情況而定,如果沒(méi)有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。
問(wèn):(1)我買(mǎi)的是BI胎牛血清,要滅活嗎?有些說(shuō)法是需要,有些說(shuō)直接解凍后就可以加入到培 養基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
答:關(guān)于BI胎牛血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話(huà)題。大多數實(shí)驗室將血清的熱滅活還是作為 常規來(lái)執行,因為有兩個(gè)作用,第一是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實(shí)驗者并沒(méi)有考慮熱處 理對血清中的生長(cháng)因子 氨基酸等成分帶來(lái)的負面影響。