GEMINI胎牛血清

GEMINI胎牛血清  

GEMINI胎牛血清    

名稱(chēng)：Gemini胎牛血清 科研人AB血清

規格：500ML

貨號：100-500

Gemini胎牛血清 100-500 **

一、牛血清質(zhì)量檢定指標

1、化學(xué)檢定：包括滲透壓（240～340）、pH（7.0～8.0）、總蛋白含量（3.5～5.0％）、血紅蛋白 （≤0.02％）

2、 微生物檢查：細菌和真菌——直接培養法、噬菌體——噬斑法和增殖法 支原體——培養法和DNA染色法 、牛病毒——細胞培養法。要求均為陰性

3、內毒素檢測——凝膠法和動(dòng)態(tài)濁度法 要求內毒素含量≤10EU/ml

4、促細胞生長(cháng)測定（SP2/0-Ag14標準規定）

1）zui大增殖濃度≥1.0×106個(gè)/ml、倍增時(shí)間≤20小時(shí)

克隆率＝（陽(yáng)性孔平均數/培養孔總數）×100％

2）貼壁效率（ VERO細胞、二倍體細胞等）

10％血清――50或100個(gè)細胞/孔

貼壁效率（％）＝（每孔克隆平均數/每孔存活的培養細胞平均數）×100

相對貼壁效率＝被測血清貼壁效率/參考血清貼壁效

以上項目檢定結果應符合2005版《中國藥典》第三部的相關(guān)規定。血清廠(chǎng)家應在此基礎上結合疫苗病毒生產(chǎn)工藝建立企業(yè)內控檢定項目并建立相應的檢定方法，保證疫苗病毒生產(chǎn)的穩定性，提高疫苗制品的質(zhì)量。

二、牛血清的分類(lèi)

根據牛出生時(shí)間和血清采制分離方法分為：

1、胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；

2、新生牛血清：出生12～24小時(shí)新生牛靜脈采血；

高級新生牛血清：采血后靜置自然析出的血清；

標準新生牛血清：經(jīng)離心分離的血清；

普通新生牛血清：融血或微融血的血清；

3、小牛血清：出生三月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清；

三、牛血清在細胞培養基中的主要功能

牛血清是細胞培養中用量zui大的天然培養基，含有豐富的細胞生長(cháng)必須的營(yíng)養成份，具有極為重要的功能。

1、提供能促使細胞指數生長(cháng)的激素、基礎培養基中沒(méi)有或含量微小的營(yíng)養物，以及某些低分子營(yíng)養物質(zhì)；

2、提供結合蛋白，識別維生素、脂類(lèi)、金屬離子，并與有毒金屬和熱源物質(zhì)結合，起解毒作用；

3、是細胞貼壁、鋪展生長(cháng)所需因子的來(lái)源；

4、起酸堿度緩沖液作用；

5、提供蛋白酶抑制劑，細胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受損傷。

四、牛血清的質(zhì)量要求

一）WHO公布的《用動(dòng)物細胞體外培養生產(chǎn)生物制品規程》中的要求

1. 牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應具備適當的監測系統。

2.有些國家還要求牛血清來(lái)自沒(méi)有用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料喂養的牛群。

3.要能證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4.血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，保證無(wú)菌。

5.無(wú)細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無(wú)大腸桿菌噬菌體污染。

6.要求血清對細胞有良好的支持繁殖作用。

二）我國在對牛血清的質(zhì)量標準zui早在2000年版《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》中提出。包括物理性狀、總蛋白，血紅蛋白、細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素，支持細胞增殖檢查。2005版藥典頒布之后，小牛血清質(zhì)量標準被納入《中國藥典》2005年版 第三部 生物制品分冊。

三）美國對牛血清的質(zhì)量要求：

Gibco 和Hyclone等美國主要血清供應商的牛血清都已進(jìn)入到我國市場(chǎng)，他們對血清質(zhì)量標準有嚴格要求，從血清來(lái)源到產(chǎn)品質(zhì)量都有明確規定。

1、血清來(lái)源 ：可從世界各地收集胎牛血清，但必須符合其質(zhì)量標準和美國農業(yè)部進(jìn)口要求。

2、血清的收集：必須符合工業(yè)生產(chǎn)的標準，低溫采集，一次分離，分離后立即混合凍存。

3、血清的制備：超低IgG胎牛血清、透析血清、γ-射線(xiàn)輻照；

4、除菌過(guò)濾：0.22μm和0.1μm濾膜過(guò)濾；

5、成品分裝：根據需要分裝成不同規格。

五、牛血清的使用所產(chǎn)生的常見(jiàn)問(wèn)題

（一）由于血清營(yíng)養豐富，貯存條件特殊，因此在貯存和使用過(guò)程中容易產(chǎn)生以下問(wèn)題：

1、改變培養液的pH值

牛血清的pH理論值為7.0～8.0，培養基在加入規定量的碳酸氫鈉后（即達到細胞生長(cháng)所需要的滲透壓），再加入10％的牛血清，一般會(huì )使培養液的pH值發(fā)生改變。因此在使用過(guò)程中應注意pH的變化，如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調pH到所需值。

2、由于血清的營(yíng)養成分豐富，非常適合細菌、真菌和支原體等生長(cháng)。國產(chǎn)血清大部分采用手工分裝，因此容易把微生物帶入而使得血清被污染。使用前如果沒(méi)有及時(shí)發(fā)現，將會(huì )把污染物帶入正在培養的細胞中，而使得細胞不能正常生長(cháng)。

3、血清在貯存解凍過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生沉淀，這是由于血清中含有大量脂蛋白、纖維蛋白及多肽類(lèi)物質(zhì)，在-15℃冷凍保存解凍后就會(huì )自然形成沉淀，隨著(zhù)保存時(shí)間的延長(cháng)，沉淀量會(huì )增加。因此在融化血清時(shí)一般應先在4℃放置使之解凍，然后放在室溫使血清*融化，以避免沉淀的增加。添加血清時(shí)應避免把沉淀加入培養液，否則由于沉淀的存在會(huì )使得所培養的細胞產(chǎn)生大量黑點(diǎn)，或者細胞表面將會(huì )覆蓋一層油狀物質(zhì)，影響細胞的正常生長(cháng)。為減少血清的損失，可以把有沉淀的血清收集起來(lái)進(jìn)行離心處理，將上清液加入培養液使用（一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾）。

（二）大規模細胞培養中牛血清對細胞及病毒滴度的影響

血清是一種成分復雜的混合物，不同批次血清對細胞生長(cháng)的促進(jìn)作用不同。大規模細胞培養中由血清引起的細胞生長(cháng)狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響表現在以下幾個(gè)方面：

1、細胞生長(cháng)速度緩慢，長(cháng)滿(mǎn)單層時(shí)間長(cháng)；從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞，用同一種培養液，分別加入10％的對照血清和待檢血清，在相同條件下培養72小時(shí)，會(huì )出現對照血清長(cháng)滿(mǎn)單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來(lái)大規模培養細胞。

2、細胞傳代后形態(tài)不正常，細胞狀態(tài)發(fā)生變化 ；由于血清的質(zhì)量問(wèn)題，使原本狀態(tài)正常的細胞經(jīng)傳代后形態(tài)會(huì )變差；比如：細胞瓶里會(huì )出現一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)（并非污染），或者細胞表面形成一層油狀覆蓋物；細胞的輪廓變得模糊，細胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細胞向四周擴展生長(cháng)。

3、細胞傳幾代后就出現脫壁現象，不能連續傳代 ；質(zhì)量較差的血清缺乏某種細胞的貼壁因子，會(huì )使細胞在傳代過(guò)程中逐漸喪失貼壁的能力。細胞會(huì )從正常的貼壁狀態(tài)，邊緣開(kāi)始萎縮，上翹。觀(guān)察到的現象就是細胞表面不光滑，晃動(dòng)細胞瓶會(huì )看到細胞表面有絮狀物隨培養液波動(dòng)。隨著(zhù)傳代次數增加，細胞萎縮的情況越來(lái)越嚴重，直到zui終*脫壁而死亡。

4、細胞長(cháng)的很好，致密的單層，狀態(tài)也很正常，但是接毒后細胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測幾乎測不出抗原滴度。這種情況也許是因為血清中含有與接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經(jīng)常會(huì )存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會(huì )把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會(huì )被抗體*中和，就沒(méi)有病毒顆粒在細胞中增殖，所以會(huì )檢測不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費，浪費人力、物力，尤其是時(shí)間上的浪費，從培養細胞開(kāi)始到接病毒，到收液至少需要一兩個(gè)月，一旦出現不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時(shí)間就白白浪費掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險之一。

5、細胞生長(cháng)的狀態(tài)一般，產(chǎn)毒少，毒價(jià)低。這種情況比較常見(jiàn)，細胞是病毒的載體，由于血清質(zhì)量不好，導致細胞生長(cháng)狀態(tài)不好，病毒就無(wú)法進(jìn)行正常的復制。并非所有病毒都不能復制，所以就造成疫苗的效價(jià)不夠，可能造成不合格產(chǎn)品。

看來(lái)一款血清直接關(guān)系細胞的生死存亡，不用擔心，上海素冉提供無(wú)支原體，低內毒素和低血紅素的，無(wú)反復凍融的高品質(zhì)血清

Gemini胎牛血清 100-500 **