細胞居中和細胞邊緣化

從經(jīng)濟和高效的角度來(lái)說(shuō)，需要根據實(shí)驗目的選擇不同規格的培養板。如在進(jìn)行藥物對待測細胞半抑制率（IC50）測試時(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設置濃度梯度；另外還可一次性測多個(gè)藥物，減少實(shí)驗誤差。

收集細胞要混勻

消化后的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開(kāi)，最好是單個(gè)的狀態(tài)，但同時(shí)又不能損傷細胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團，然后懸浮離心后的細胞團時(shí)，先不要把所有液體都加進(jìn)，一般先加2mL液體，然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起，細胞要像云霧一樣散開(kāi)，這樣易于形成單細胞。

鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個(gè)孔里面加1mL的培養基，晃動(dòng)使之鋪勻整個(gè)孔底，然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細胞懸液會(huì )平鋪在整個(gè)孔底，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這里又有一個(gè)竅門(mén)，放在顯微鏡的載物臺上面。因為顯微鏡的載物臺是水平校正過(guò)的，比什么桌面、超凈臺什么的要平多了。在載物臺上放置20-30分鐘，細胞不差這一會(huì )溫度和二氧化碳的，等細胞貼壁了，輕輕移入到孵箱中。
鋪96孔板，我每孔是加100微升細胞懸液，加完半邊板48孔后，將剩下的未加的細胞懸液再混一下，再繼續加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次數太多會(huì )導致細胞集中成堆。