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產(chǎn)品展示
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牛血清白蛋白(BSA)的應用
  • 發(fā)布日期:2023-07-27      瀏覽次數:414
    • 牛血清白蛋白(BSA)是牛血清中的一種球蛋白,包含607個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點(diǎn)為4.7。

      應用:
      牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗中有廣泛的應用,例如在WB實(shí)驗中加入BSA,通過(guò)提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度,對酶起保護作用。
      防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素,如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。

      測定蛋白濃度
      按50:1配置BCA工作液。
      10ulC液(蛋白標準)+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。
      再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。
      分別加PBS定容至20ul。
      各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時(shí)。
      用酶標儀測定蛋白濃度:測定A562,依標準曲線(xiàn)算出蛋白濃度。

      SDS-PAGE電泳
      1、制膠:按比例配制分離膠,緩緩地搖動(dòng)溶液,使激活劑混合均勻,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液中,靜置40min。
      同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時(shí)不要過(guò)于劇烈以免引入過(guò)多地氧氣。
      吸去不連續系統中下層分離膠上的水分,連續平穩的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,靜制60min以上以保證聚合。
      2、預電泳:將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預電泳20-30min。
      (目的是清除凝膠內的雜質(zhì), 疏通凝膠孔徑以保證電泳過(guò)程中電泳的暢通)。
      3、樣品準備:首先計算上樣體積,然后按樣品上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,冰上5分鐘。
      4、加樣:預電泳后依次加入標準品(Marker)和待分析樣品。
      (加樣時(shí)間要盡量短,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應。每個(gè)泳道加5ul 。)
      5、電泳:加樣完畢,選擇80V恒壓進(jìn)行電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處(一般約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(一般約為1小時(shí)20分鐘)。

    聯(lián)系方式
    • 電話(huà)

      400-0918-500

    • 傳真

    在線(xiàn)客服
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