冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便,而多應用于手術(shù)中的快速病理診斷。
制備步驟:
將組織在恒溫冷凍機里面切片。冷凍腔內的溫度一般設置為-18℃至-25℃,根據不同組織調節不同腔溫,平時(shí)應將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機應長(cháng)期處在冷凍恒溫狀態(tài)。
1、當冰凍組織提取好之后,在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替),放上組織,速凍。
2、待組織凍結后,將冷凍頭裝刀切片機上。
3、粗切,修出切面細切幾張,用毛筆刷去刀上組織片。
4、放下抗卷板,開(kāi)始切片,切片速度一般為5-6微米,切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋酸液(97ml甲醇+3ml冰醋酸)中固定,固定時(shí)間為10-20秒。
作用:
OCT冰凍切片包埋劑是由聚乙二醇和金屬硬脂酸鹽等化學(xué)品混合而成的。其中,聚乙二醇是一種聚合物,主要作用是增加包埋劑的黏度,以便于固定組織樣本;金屬硬脂酸鹽則可以幫助固定細胞膜和細胞外基質(zhì),防止組織樣本在切片過(guò)程中失去原有的形態(tài)和結構。