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天然培養基的用途有哪些?
  • 發(fā)布日期:2023-04-23      瀏覽次數:794
    • 1.蛋白質(zhì):雖然蛋白質(zhì)是血清的主要成分,但許多蛋白質(zhì)的功能在體外情況下所剩無(wú)幾,而有幾種有關(guān)的蛋白質(zhì)可能是需要的,例如攜帶礦物質(zhì)、脂肪酸、激素的蛋白。已知可滿(mǎn)足這些需求的蛋白質(zhì)有:白蛋白,它作為脂類(lèi)或礦物質(zhì)及球蛋白的一種攜帶者;纖連蛋白(冷不溶性球蛋白),它可促進(jìn)細胞貼壁;α2-巨球蛋白,它是胰酶的抑制劑。此外,胎兒血清中的胎球蛋白可增進(jìn)細胞的貼附;轉鐵蛋白可結合鐵離子,使其毒性減小而具有生物可利用性。其他一些未知的蛋白質(zhì)對于細胞的貼附和生長(cháng)可能也是必需的。蛋白質(zhì)還可增加培養基的成泡性,在吹打和攪拌時(shí)可減少切力,可能還會(huì )增加培養基的緩沖力。

      2.生長(cháng)因子:自然凝集得到的血清比用物理方法(離心)去除細胞的血漿刺激細胞增殖的效果更好。這種刺激效果的增加是由于凝集過(guò)程中血小板生長(cháng)因子(PDGF)的釋放。PDGF是具有有絲分裂原活性的多肽家族中的一員,可能是血清中的主要生長(cháng)因子。PDGF刺激成纖維細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生長(cháng),而其他血小板生成因子,如TGF-3,可能會(huì )抑制其生長(cháng)或者促進(jìn)上皮類(lèi)細胞的分化。
      其他生長(cháng)因子,如成纖維細胞生長(cháng)因子(FCFs)、表皮細胞生長(cháng)因子(ECF)、內皮細胞生長(cháng)因子如血管內皮細胞生長(cháng)因子(VECF)和Angiogenin,胰島素樣生長(cháng)因子ICF-Ⅰ和IGF-Ⅱ,都已從完整組織或培養過(guò)細胞的培養基中分離得到,各自具有不同程度的特異性,它們可能存在于血清中,但含量非常少?,F在,許多生長(cháng)因子都以重組蛋白的形式實(shí)現了商業(yè)化,有些還有長(cháng)效類(lèi)似物(long-form analogues),可增加有絲分裂原的活性和穩定性。

      3.激素:胰島素可促進(jìn)細胞對葡萄糖和氨基酸的攝取,這可能是由于具有有絲分裂原的作用從而產(chǎn)生這一特性或增加了ICF-Ⅰ受體的活性。IGF-Ⅰ和ICF-Ⅱ可結合于胰島素受體,但它們也有自己的特異性受體,而胰島素與這些受體的親和力很低,IGF-Ⅱ也可刺激葡萄糖的攝取。血清中含有生長(cháng)激素,特別是胎兒期的血清,生長(cháng)激素與促生長(cháng)因子(IGFs)結合可能具有有絲分裂原的效果。血清中還有含量不等的氫化可的松,特別是在胎牛血清中,它可促進(jìn)細胞的附著(zhù)和增殖,但在特定的條件下(如高細胞密度)可能使細胞靜止,還能夠誘導細胞的分化。

      4.營(yíng)養物及代謝物:血清可能還含有氨基酸、葡萄糖、酮酸、核苷及其他一些營(yíng)養物質(zhì)和中間代謝物,對于成分簡(jiǎn)單的培養基,這些物質(zhì)可能很重要;而對于那些成分復雜的培養基,特別是含有高濃度氨基酸和其他補充物的培養基,這些物質(zhì)就不那么重要了。

      5.脂類(lèi):血清中含少量脂肪酸、亞油酸、油酸、乙醇/胺和磷酸一乙醇/胺,它們通常結合于蛋白質(zhì)如白蛋白上。

      6.礦物質(zhì):血清替代實(shí)驗表明微量元素及鐵、銅、鋅都可能結合于血清蛋白質(zhì)。McKeehan等已證實(shí)血清中的硒是細胞培養所需求的,它可能作為谷胱甘肽(GSH)合成酶的輔助因子有助于消除自由基的毒性。

      7.抑制物:血清中可能也含有抑制細胞增殖的物質(zhì),其中一些可能是血清制備過(guò)程的產(chǎn)物(例如,來(lái)源于過(guò)濾之前污染的細菌毒素或抗體,其含有γ-球蛋白的片段能夠與培養細胞的表面結合位點(diǎn)產(chǎn)生交叉反應),而另一些是生理上的非生長(cháng)調節因子,例如TGF-β。熱滅活可去除血清中的一些物質(zhì),減少免疫球蛋白的細胞毒性而不破壞多肽生長(cháng)因子,但也可能去除一些較不穩定的成分,因而并不總是比未處理的血清安全。

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