能量來(lái)源
每一個(gè)生長(cháng)培養基都需要碳源,以供細胞新陳代謝。碳源通常是葡萄糖,但也可以是其他糖類(lèi),如半乳糖、己糖、果糖或其他碳源(如丙酮酸,谷氨/酰胺)。葡萄糖通常以終濃度為5.5 mm的含量添加,大約等于人體血液中的葡萄糖水平。然而,你可以購買(mǎi)葡萄糖濃度變化范圍很廣的培養基來(lái)滿(mǎn)足你的具體需求。你甚至可以購買(mǎi)不含葡萄糖的培養基,然后自己定制濃度,模擬高糖的糖尿病狀況,或者研究低糖應激反應。
緩沖液
細胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4,否則它們無(wú)法最好地發(fā)揮細胞功能,以供生長(cháng)和存活。在二氧化碳含量較高的培養器中,二氧化碳與水發(fā)生反應,產(chǎn)生氫離子,使培養基酸化。為了中和二氧化碳產(chǎn)生的酸度,并在培養基中保持最佳pH值,大多數培養基都使用化學(xué)緩沖系統。然而,一些緩沖方法會(huì )干擾細胞生長(cháng)。
哺乳動(dòng)物細胞常見(jiàn)的緩沖系統是碳酸/氫鈉,生物影響最小。碳酸/氫鈉與氫離子反應生成二氧化碳,隔離它們以保持pH值。然而,碳酸/氫鈉的一個(gè)缺點(diǎn)是,它在生理pH值上不是最佳的緩沖效果。為了避免這個(gè)問(wèn)題,研究人員經(jīng)常使用替代品,如HEPES,增加某些培養基類(lèi)型的緩沖能力。
酚紅
由于維持pH值對細胞培養至關(guān)重要,許多培養基配方包括一種名為酚紅的pH指示劑,其在酸性條件下變黃(< 6.8),在基本條件下呈粉紅色(> 8.2)。雖然通常不是問(wèn)題,但酚紅可以模擬雌激素,因此,當培養表達雌激素受體的細胞類(lèi)型時(shí),通常被排除在外。沒(méi)有酚紅的培養基可以用于比色測定,如MTT細胞增殖實(shí)驗,苯/酚的色譜可能會(huì )干擾光譜光度測量的讀數,從而使結果混淆。
血清
對許多培養體系來(lái)說(shuō),一個(gè)重要組成部分是血清,通常是胎牛血清,稱(chēng)為FBS。血清來(lái)自于血液,是糖、鹽、脂類(lèi)、生長(cháng)因子等許多成分的混合物。由于它的生物來(lái)源,很難維持再生性,因為每一批血清都是獨1無(wú)2的。為了規避這一問(wèn)題,一些實(shí)驗室使用化學(xué)定義的血清替換物,一些實(shí)驗室則購買(mǎi)一整批次的特定的血清,以確保一致的結果。
代謝物,維生素和礦物質(zhì)
DMEM的成分列表主要分為三大類(lèi):氨基酸、維生素/輔因子和無(wú)機鹽(包括鈣和鎂)。許多這些成分在所有細胞培養基中都是常見(jiàn)的,而精確的組合和濃度已經(jīng)對細胞生長(cháng)進(jìn)行了優(yōu)化。盡管如此,許多實(shí)驗室還是選擇用額外的非必需氨基酸補充他們的培養基,以防止細胞使用葡萄糖或谷氨/酰胺來(lái)合成。此外,一些公司生產(chǎn)無(wú)鎂和鈣的培養基用于特定的研究,選擇時(shí)請仔細查看。
抗生素
很多實(shí)驗室都在他們的細胞培養中加入抗生素,以防止不需要的細菌或真菌的生長(cháng),即使是無(wú)菌工作。常用的抗菌補充劑是青/霉素和鏈/霉素(pen/strep)的組合,在完整細胞培養基中,終濃度為青/霉素50-100 IU/mL和鏈/霉素50 -100 g/mL。然而,一些實(shí)驗室選擇不使用抗生素,因為抗生素會(huì )對細胞產(chǎn)生不必要的影響,或者可以掩蓋低水平的細菌污染。根據需要,你可以決定是否在培養基中使用抗生素。