LB培養基是一種培養基的名稱(chēng),生化分子實(shí)驗中一般用該培養基來(lái)預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求。也可用于培養基因工程受體菌(大腸桿菌)??煞譃?/span>液體培養基和固體培養基。LB一般被解釋為L(cháng)uria-Bertani培養基,然而根據其發(fā)明人貝爾塔尼(Giuseppe Bertani)的說(shuō)法,這個(gè)名字來(lái)源于英語(yǔ)的lysogeny broth,即溶菌肉湯。
肉膏蛋白胨培養基是一種廣泛用于培養細菌的培養基。而LB培養基則是一種近年來(lái)用于培養基因工程受體菌(大腸桿菌)的常用培養基。兩者都屬于半合成培養基。肉膏蛋白胨的培養基主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。而LB培養基的主要成分是胰蛋白胨、酵母提取物和NaCl。高氏合成一號培養基是一種用于培養放線(xiàn)菌的合成培養基。培養基中的可溶性淀粉作為碳源和能源。
根據《分子克隆實(shí)驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著(zhù))配制每升培養基,應該在950 ml去離子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調pH至7.0.用去離子水定容至1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
培養的菌種一般是經(jīng)過(guò)改造的無(wú)法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌.通過(guò)培養工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒,工程菌的有效擴增是生化分子實(shí)驗的基礎.
LB培養基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化鈉(NaCl) 10g/L
另外根據經(jīng)驗值用NaOH調節該培養基的pH,使其達到7.4(該pH適合使用*的原核表達菌種E.coli的生長(cháng))
固態(tài)培養基
LB固體培養基1L和液體一樣,加15g~20g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
倒板
1.配制:100mlLB培養基加入1~1.5g瓊脂粉
2.抗生素的加入:高壓滅菌后,將融化的LB固體培養基置于55℃的水浴中,待培養基溫度降到55℃時(shí)(手可觸摸)加入抗生素,以免溫度過(guò)高導致抗生素失效,并充分搖勻。
3.倒板:一般15ml-20ml倒1個(gè)板子。培養基倒入培養皿后,打開(kāi)蓋子,在紫外下照10-15分鐘。
4.保存:用封口膠封邊,并倒置放于4℃保存,一個(gè)月內使用。
ph值需要控制在7.4