卵內儲存的營(yíng)養物質(zhì)，主要由清蛋白、球蛋白、磷蛋白、卵磷脂及一些酶等組成，在胚胎發(fā)育過(guò)程中起著(zhù)積極作用。鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)和大多數魚(yú)類(lèi)的卵黃發(fā)生有兩種來(lái)源：一是由卵母細胞本身合成，稱(chēng)內源性卵黃；一是由卵母細胞以外的組織細胞合成，稱(chēng)外源性卵黃，如脊椎動(dòng)物由肝臟合成卵黃前體，再輸送至卵巢，由卵母細胞攝入。
作用
通過(guò)免疫注射產(chǎn)蛋雞，即可由其生產(chǎn)的蛋黃中提取相應的抗體，并可用于相應疾病的預防和治療，這類(lèi)制劑稱(chēng)為卵黃抗體。卵黃抗體在臨床上應用較為廣泛，其優(yōu)點(diǎn)是雞蛋比動(dòng)物血清更容易獲得，且卵黃中抗體含量較高。禽類(lèi)的免疫器官法氏囊主要控制機體的體液免疫，機體的免疫應答發(fā)生后，體液中成熟的骨髓依賴(lài)性淋巴細胞受相關(guān)免疫信號通路的介導，分化為漿細胞，隨即產(chǎn)生大量抗體釋放入血液中。血液中的大量抗體逐漸轉移入卵黃中，并適量地蓄積。收集到的卵黃抗體，即為通過(guò)同一抗原反復刺激后產(chǎn)生的多克隆抗體。卵黃中主要的免疫球蛋白為IgY，其功能與作用類(lèi)似于哺乳動(dòng)物血清中的IgG。雞lgY的分子量約180k Da，由兩條輕鏈和兩條重鏈組成，分子量分別為60~70k Da和22~30k Da，等電點(diǎn)約為5.2。IgY具有較強的耐熱、耐酸、抗離子強度和一定的抗酶解能力。
卵黃中的主要成分是蛋白質(zhì)和脂肪，其比例為1:2。大部分蛋白質(zhì)都是脂蛋白，存在于卵黃顆粒中，不溶于水，只有卵黃球蛋白（α、β、γ）是水溶性的，而IgY是γ卵黃球蛋白。因此lgY的分離純化首先需要有效地去除卵黃中的脂類(lèi)，從水溶性蛋白中分離IgY。目前已建立了諸如PEG、硫酸葡聚糖、天然膠，如海藻酸鈉、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步純化蛋白質(zhì)。
實(shí)驗材料
1.健康產(chǎn)蛋雞（最好是SPF雞）、免疫抗原（如雞新城疫滅活疫苗）、弗氏佐劑。
2.滅菌生理鹽水或0.01mol/L pH7.2 PBS、海藻酸鈉、飽和硫酸銨等。
3.毛細滴管、注射器、碘酊棉、酒精棉、燒杯、玻璃棒、離心管、pH試紙等。
4.微量振蕩器、離心機、分光光度計等。
操作方法
1.實(shí)驗動(dòng)物的選擇：選擇健康、產(chǎn)蛋率高的蛋雞，購進(jìn)后飼養1周左右，觀(guān)察其健康情況。
2.抗原的準備：免疫抗原有多種選擇，一般采用滅活的病原體，也可以選擇激素類(lèi)、蛋白類(lèi)物質(zhì)，使用前可以選用弗氏*佐劑乳化抗原。
3.動(dòng)物免疫：免疫方式主要有口鼻接種、皮內接種、皮下接種、肌肉注射、腹腔注射以及靜脈注射。禽類(lèi)的免疫方式多用肌肉注射，接種中采用胸肌多點(diǎn)注射。使用弗氏*佐劑充分乳化抗原。以商用雞新城疫滅活苗免疫為例，首.次免疫的劑量可以控制在1~2 mL，抗原含量為0.3-0.5 mg/kg（30日齡的蛋雞免疫劑量為0.4 mg/次）2周后進(jìn)行2次免疫，4周后第3次免疫之后每隔1個(gè)月可加強免疫1次。
4.免疫雞血清抗體效價(jià)檢測：一般使用瓊脂免疫擴散實(shí)驗檢測免疫雞血清中的抗體效價(jià)。將免疫蛋雞所用的抗原滴加于抗原孔，免疫雞血清滴加于抗體孔?？乖着c抗體孔之間出現沉淀線(xiàn)者，為陽(yáng)性。最高稀釋倍數血清孔出現沉淀線(xiàn)，即為該血清的抗體效價(jià)。一般效價(jià)達到1:64以上時(shí)，可開(kāi)始收集免疫蛋雞所產(chǎn)雞蛋。
5.收集卵黃抗體：先用清潔水洗去蛋殼表面的糞污，再使用碘酊和酒精消毒。無(wú)菌條件下打開(kāi)胚殼，傾出蛋黃至滅菌大燒杯中，以1:9的比例加入滅菌生理鹽水或0.01 mol/L pH7.2 PBS稀釋并充分混勻，調節pH至5.2，勻漿后的卵黃抗體可以進(jìn)一步提純，也可加入0.01%硫柳汞或每毫升卵黃液加入青.霉素、鏈.霉素各1000單位進(jìn)行防腐抑菌，搖勻后分裝于消毒好的瓶中，冷凍干燥保存或制成干粉利用。
6.IgY的純化：卵黃混合液反復凍融3次，6000 r/min離心30 min，分離出卵黃蛋白，加入終濃度0.07%的海藻酸鈉和0.02%的NaCl，振蕩，使海藻酸鈉充分溶解，靜置30 min，6000 r/min離心30 min，上清液調節pH到7.2，再依次用50%、33%、3%的飽和硫酸銨（pH 7.2）提取IgY，用 SephadexG-25脫鹽。
結果判定
對獲得的卵黃抗體進(jìn)行的效價(jià)及活性測定，可采用免疫電泳實(shí)驗、瓊脂免疫擴散實(shí)驗、血凝抑制實(shí)驗、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗等多種抗體檢測方法。
