細胞培養基作為細胞培養基的組成成分,胎牛血清為細胞生長(cháng)提供激素、生長(cháng)因子、結合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附因子等物質(zhì),促進(jìn)體外細胞培養。
但在某些研究中,需要避免胎牛血清中一些小分子物質(zhì)的影響,就需要用到特殊處理的血清——
透析胎牛血清。
透析胎牛血清的生產(chǎn)工藝
1、透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎上進(jìn)行加工的
胎牛血清在無(wú)菌條件下要經(jīng)過(guò)多重過(guò)濾,進(jìn)行一系列的檢測:
理化性質(zhì)檢查(如滲透壓和pH值)
成分檢查(如內毒素和血紅蛋白)
外源因子檢查(如細菌、病毒和支原體)
促進(jìn)細胞增殖的檢查等
透析胎牛血清為保證其性能和安全性,也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查。
2、透析胎牛血清,需經(jīng)過(guò)透析處理
在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15M NaCl中透析。由于該透析膜只允許10 kDa以下的小分子穿過(guò),在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10 kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子。
那么透析的效果如何?以及透析到何時(shí)呢?
由于不可能監測全部小分子,因此常選用葡萄糖為代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL,即可以停止透析了。透析過(guò)程中,除監測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細監測pH值和滲透壓。
3、該透析一般采用切向流過(guò)濾
也就是液體流動(dòng)方向與過(guò)濾方向呈垂直方向的過(guò)濾形式。透析胎牛血清該方式使液體流動(dòng)在濾膜表面產(chǎn)生剪切力,減小了濾膜上的物質(zhì)堆積,保證了穩定的過(guò)濾速度。