可能原因:1 細胞崩解了;2 培養基可能污染了,取部分培養基進(jìn)行檢菌試驗。
細胞培養中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲(chóng)污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養中污染的特點(diǎn)如下:
1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會(huì )渾濁變黃,對細胞生長(cháng)影響明顯。
2、支原體:黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會(huì )渾濁,原體感染,國內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去,支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死/去。
3、黑膠蟲(chóng):可以穿透濾膜,也可以通過(guò)空氣傳播,低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去,培養液也是不渾的,一般不會(huì )太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長(cháng)狀態(tài)良好,且觀(guān)測到的運動(dòng)物無(wú)明顯增多,且培養液顏色、透明度無(wú)明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發(fā)現類(lèi)似現象。對細胞生長(cháng)狀態(tài)不會(huì )有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會(huì )自然消失,除更換血清外無(wú)須特殊處理。
4、真菌:一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開(kāi)始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。真菌生長(cháng)的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現,但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
5、原蟲(chóng):培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點(diǎn)狀物數量非常多,輕微活動(dòng),細胞雖然可以生長(cháng)但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會(huì )與細胞爭奪營(yíng)養,這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優(yōu)勢所以不會(huì )影響到細胞的正常生長(cháng),只有當他們到達一定的數量時(shí)就會(huì )影響到細胞的生長(cháng),最終形成惡性循環(huán)。
6.病毒:組織細胞培養過(guò)程中,如果沒(méi)有除去潛在的病毒,就會(huì )產(chǎn)生病毒污染。目前,從原代猴腎細胞的培養中已發(fā)現不少于20種血清性病毒,盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題 。
7、非同種細胞污染 :即是細胞交叉污染,由于細胞培養操作時(shí)各細胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴格分開(kāi),往往會(huì )使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實(shí)驗宣告無(wú)效。非細胞培養物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細胞培養所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。