酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane，簡(jiǎn)稱(chēng)NC膜)，是蛋白印跡廣泛使用的轉移介質(zhì)，對蛋白有很強的結合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學(xué)發(fā)光（Luminol類(lèi)）、常規顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高。在膠體金試紙中用做C/T線(xiàn)的承載體，同時(shí)也是免疫反應的發(fā)生處。NC膜是生物學(xué)試驗中重要的耗材之一。
    硝酸纖維素NC膜的使用很簡(jiǎn)便，比如不需要甲醛預處理，只要在去離子水面浸潤排出膜內氣泡，再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了；硝酸纖維素 NC膜很容易封閉，也不需要特別嚴謹的清洗條件。轉移到硝酸纖維素NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩定保存很長(cháng)時(shí)間，不過(guò)要注意的是純的硝纖膜在比較脆，又容易卷，操作要小心，不適合用于需要多次重復清洗的用途，因為經(jīng)不起多次“折磨”。 
    選擇硝纖NC膜時(shí)要注意的是選擇合適的孔徑，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜，小于20KD的話(huà)建議選擇0.2um的，如果小于7KD的話(huà)選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC膜?；煊泻姿崂w維（CM）的NC膜結合力會(huì )有所降低。 
    另外，由于NC膜上結合的蛋白會(huì )因為一些去污劑而被代替，因此在封閉時(shí)使用較溫和的Tween20，而且濃度不要超過(guò)0.3%（據說(shuō)0.05%效果）。一般而言，NC膜越純，其蛋白結合能力就越高，所以要增加WB的靈敏度和分辨率，提高所使用膜的純度是個(gè)可以考慮的選擇。如果NC膜攙雜一些醋化纖維素，會(huì )影響蛋白質(zhì)結合。ADVANTEC生產(chǎn)的硝酸纖維素濾膜由于是純NC膜，比較脆，需要小心操作。

注意事項：
1．由于硝酸纖維素膜是親水膜，故不需要在乙醇、甲醇等溶液中浸泡活化。
2．硝酸纖維素膜比較脆，容易破碎，操作要小心。
3．本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
4．為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

NC膜的應用技巧：
1. 蛋白與膜的結合原理
蛋白與膜的結合原理， 已知的結合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等，確切的結合原理并不明確，主要靠假說(shuō)來(lái)支撐。主要有兩種假說(shuō)：
1）首先兩者靠靜電作用力結合，然后靠H鍵和疏水作用來(lái)維持長(cháng)時(shí)間結合。
2）首先兩者靠疏水作用結合，然后靠靜電作用來(lái)維持長(cháng)時(shí)間結合。
兩條假說(shuō)，都表明其結合過(guò)程分為兩步，首先結合和后面長(cháng)時(shí)間結合。由于結合原理的不明確性，導致在這方面的工作非常依賴(lài)實(shí)踐經(jīng)驗。
2. 膜對結合的影響
1）膜孔徑
有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來(lái)區分不同的膜，但是請注意這只僅僅限于同一廠(chǎng)家的產(chǎn)品，如果是不同廠(chǎng)家的產(chǎn)品，這種比較是無(wú)意義的。膜孔徑與層析速度的關(guān)系，已在上文描述。隨著(zhù)膜孔徑減小，膜的實(shí)際可用表面積遞增，膜結合蛋白的量也遞增. 估量表面積的參數為表面積比率（實(shí)際可用表面積與所用膜平面積的比率）。另外，膜孔徑越小，層析速度也越小，那么金標復合物通過(guò)T線(xiàn)的時(shí)間也就越長(cháng)，反應也就越充分。
綜合以上兩點(diǎn)，結論為膜孔徑越小靈敏度越高。但是同時(shí)也減慢了跑板速度，增加了非特異性結合的機會(huì )，也就是假陽(yáng)性越高.所以要按照試驗結果挑選適合實(shí)際項目的膜，找到合適的平衡點(diǎn)。
2）不同廠(chǎng)家的膜差異
這個(gè)差異主要來(lái)源于兩點(diǎn)：
1> 生產(chǎn)膜時(shí)，使用的聚合物和表面活性劑的來(lái)源，類(lèi)型，數量不同。同理，在膜處理中這兩類(lèi)物質(zhì)一般會(huì )對性能產(chǎn)生較大影響。 2> 處理過(guò)程不同。
3. 生物原料，緩沖溶液的試劑和配方
1）生物原料， 作為CT線(xiàn)的生物原料使用情況各異，所以這里只做略述。
首先，單克隆抗體與膜的結合優(yōu)于多克隆抗體，主要時(shí)由于多克隆抗體有很多不同的表面位點(diǎn)，而各位點(diǎn)與膜的結合條件都有細微的差別，毫無(wú)疑問(wèn)就增加了優(yōu)化難度。其次，分子量越大，蛋白越難結合到固相材料上。
2）緩沖液
大家關(guān)心的可能就是希望獲得一個(gè)性能優(yōu)良的配方，包括緩沖液，封閉液等等處理溶液配方。緩沖液的構成一般是：PBS（或其他緩沖體系）+作用物質(zhì)（針對某一特定問(wèn)題）+PH調整. 參考過(guò)以前的各種資料后，個(gè)人意見(jiàn)為配方原則為宜簡(jiǎn)不宜繁，根據自己的需要添加作用物質(zhì)，原來(lái)的很多需要添加的作用物質(zhì)，由于膜制造技術(shù)的改進(jìn)已經(jīng)不再需要。推薦的緩沖體系為0.01M PBS PH7-7.2， 該緩沖體系對多種抗原抗體都有良好的適應性。
作用物質(zhì)的情況大致羅列如下：
少量NACL，減少信號強度，消假陽(yáng)。
有機醇（甲醇，異丙醇等），潤濕膜，減少膜帶有的靜電，利于結合包被。個(gè)人不推薦，因制膜工藝改進(jìn)。
表面活性劑（TW20，TX100），增加親水力，可避免線(xiàn)條中空現象，也可增色。
糖，保護劑，減緩老化速度，也可以增加親水力同上。
調PH到某個(gè)位置，可以消假陽(yáng)。
4. 點(diǎn)樣環(huán)境
環(huán)境濕度對點(diǎn)膜過(guò)程非常重要。濕度一般在45-65%。濕度過(guò)低，膜上容易聚集靜電荷，點(diǎn)膜容易出現散點(diǎn)，導致測試會(huì )出現疏水斑。濕度過(guò)高，膜上毛細作用加強，點(diǎn)膜容易引起CT線(xiàn)變寬甚至擴散。為了保證點(diǎn)樣時(shí)膜濕度的均一性，一般在點(diǎn)樣前把膜放到該濕度條件下平衡一段時(shí)間。
5. 點(diǎn)樣儀器與膜面情況的關(guān)系
有兩種點(diǎn)樣方式，劃膜式和非接觸點(diǎn)膜式、非接觸點(diǎn)膜式優(yōu)于劃膜式，進(jìn)口劃膜式優(yōu)于國產(chǎn)劃膜式。
因劃膜式為軟管將抗體劃到膜表面，而膜本身的物理性質(zhì)為軟脆，劃管會(huì )在其表面留下印痕.進(jìn)口的劃膜機由于使用的材料和控制系統較好，所以留下的劃痕較輕，而國產(chǎn)儀器較差，留下的劃痕也就比較嚴重。 劃痕容易對層析的金標復合物形成阻力，導致假陽(yáng)性。 同時(shí)容易出現跑板時(shí)在T線(xiàn)位置出現若有若無(wú)一條細線(xiàn)（鬼線(xiàn)），而跑板結束后鬼線(xiàn)消失的奇怪現象。
6. 膜的寬度與點(diǎn)樣位置
膜的寬度一般有18mm（or 20mm）和25mm兩種， 分別使用在做測試條和做測試板上。然而，不同的T線(xiàn)點(diǎn)樣位置將帶來(lái)不同的靈敏度。點(diǎn)樣位置上移，金標復合物通過(guò)T線(xiàn)位置時(shí)速度變慢，反應時(shí)間增加，靈敏度升高。反之靈敏度降低。這個(gè)方法可以用來(lái)改變靈敏度和消除假陽(yáng)性。
7. 溶液在膜上的擴散
溶液在膜上的點(diǎn)樣量一般情況下為1ml/cm。溶液在膜上的擴散是趨向兩端的，噴點(diǎn)上去的是均勻的抗體溶液，但當干燥時(shí)線(xiàn)條邊緣的干燥速度高于中間，中間的抗體會(huì )不斷向兩邊擴散，所以干燥后抗體是向線(xiàn)條的兩端聚集的。一般情況下不影響你的試驗。如果你發(fā)現線(xiàn)條出現兩端紅，中間淡的現象，就要考慮這個(gè)問(wèn)題了?？梢约尤缟厦嬲f(shuō)的作用物質(zhì)來(lái)解決。
8. 點(diǎn)膜前后的封閉作用
從供應商處購買(mǎi)回的膜基本上都是已經(jīng)優(yōu)化處理好的，直接點(diǎn)膜就可使用.然而我們還是經(jīng)常會(huì )遇到關(guān)于封閉的討論。其實(shí)封閉不象大家認為的那樣，一封閉什么問(wèn)題都解決了. 老問(wèn)題走了新問(wèn)題又來(lái)了，而且更麻煩，我要說(shuō)的是慎用封閉。我極其反對點(diǎn)膜前封閉的做法。原因為廠(chǎng)家在生產(chǎn)膜時(shí)候，各種配方是混合加入原漿的。而點(diǎn)膜前封閉時(shí)要將膜浸泡在封閉液內，必然擾亂了膜內正常的物質(zhì)分布。由此引發(fā)了許多問(wèn)題，也降低了工作效率。也有廠(chǎng)家遇到不封閉就無(wú)法包被上膜的問(wèn)題，其實(shí)可以通過(guò)其他辦法來(lái)解決，封閉必然是下測。
經(jīng)常使用的封閉手法有兩種：流動(dòng)封閉，將作用物質(zhì)處理在樣品墊上。膜上定點(diǎn)封閉，將作用物質(zhì)配成溶液噴點(diǎn)在膜的特定位置上。該方法需要使用BIODOT的AIRJET噴頭，可以將不合格的半成品大板重新復活。只要是將封閉做在了膜上，就必然會(huì )對產(chǎn)品的穩定性造成影響，具體的影響程度要通過(guò)穩定性測試來(lái)評判。
9. 膜的儲存
剛生產(chǎn)出的膜一般含有5-10%的水分。關(guān)于膜的老化機理，有個(gè)理論支持，不過(guò)爭議比較大。理論認為：膜的老化是因為膜上的水分蒸發(fā)，使膜變得疏水，帶電荷并變脆。儲存膜一般要求是避光，密封，過(guò)干或過(guò)濕都不利。在這種保存條件下，一般可以放置兩年。但是如果膜上做了封閉處理，就要根據具體試驗情況來(lái)判斷了。有些膜由于生產(chǎn)工藝的問(wèn)題，使用后靈敏度會(huì )在一段時(shí)間內發(fā)生變化，遇到這種問(wèn)題，就需要在點(diǎn)膜后放置一段時(shí)間，待穩定后方可進(jìn)入調試生產(chǎn)。