酶免疫試驗之所以能成為臨床免疫檢驗中的主導技術(shù)，是與它的方法上的特異性和靈敏性、操作上的簡(jiǎn)便性以及試劑的穩定性分不開(kāi)的，還有很重要的一點(diǎn)是，其對環(huán)境沒(méi)有污染威脅。
   盡管如此，作為一項免疫檢驗技術(shù)，酶免疫試驗還是有其局限性的，不但所檢測的生物學(xué)體液樣本如血清中有可能存在各種干擾實(shí)驗的因素，而且在實(shí)驗過(guò)程中，影響結果的因素也很多，尤其是進(jìn)行手工的ELISA測定時(shí)。

   此外，在定性ELISA測定中，陽(yáng)性判定值（CUT-OFF）的建立，是在一定的統計學(xué)基礎上的，相對于某個(gè)具體的受檢者來(lái)說(shuō)，其有可能并不具備正確性。例如，使用ELISA方法檢測抗HCV及抗HIV或HBsAg，有時(shí)候，檢測所得的陽(yáng)性結也許并不是真正的陽(yáng)性，而需要使用其他方法如重組免疫印跡（recombinantimmunoblotas—say，RIBA）、蛋白印跡（Westernbl。t，WB）或中和試驗來(lái)確認，才能報告陽(yáng)性。這里抗HCV和抗HIV的檢測均使用病毒部分的基因工程抗原，其他一些病毒如流感病毒、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人體后，亦或一些自身抗體，也有可能會(huì )導致假陽(yáng)性反應。

   HBsAg的測定主要是弱陽(yáng)性的問(wèn)題，這與ELISA測定的“灰區”有關(guān)系，處于cut-off值周?chē)嗉?ldquo;灰區”的結果的可靠性通常較差，陽(yáng)性當然需要確認，陰性卻也未必是真，這一點(diǎn)在血站篩檢獻血員血液時(shí)是非常重要的，必須引起注意，并采取適當的措施，防止此類(lèi)嚴重影響人們健康的傳染性疾病經(jīng)輸血傳播，本書(shū)后面的有關(guān)章還會(huì )對此問(wèn)題做詳細論述。此外，免疫測定的基礎是抗原抗體的特異反應，因此，如檢測抗原，除了要求抗體（單抗或多抗）是特異的外，還要求待測抗原上必須存在有能與所用抗體結合的抗原決定簇，如果因為基因突變導致某些位點(diǎn)的不表達，或者結合位點(diǎn)因為某些原因被封閉或阻斷，都會(huì )影響抗體與抗原的結合，造成假陰性結果。

   如檢測抗體，則要求所用包被抗原應盡可能包含所有的特異抗原決定簇，同時(shí)又盡可能不含有非特異的成分，這一點(diǎn)往往由于技術(shù)水平的限制而難以*做到，因此，從某種意義上來(lái)說(shuō)，假陽(yáng)性假陰性是不能*避免的，盡管通過(guò)努力，可以將其降至很低的程度。這也是建立臨床免疫檢驗方法所努力的方向。