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熱滅活胎牛血清會(huì )存在哪些沉淀物?
  • 發(fā)布日期:2020-01-28      瀏覽次數:872
    •    熱滅活胎牛血清會(huì )存在哪些沉淀物?
        血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養物質(zhì)、提供激素和各種生長(cháng)因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。
        基于多年的實(shí)驗研究,用于細胞培養的熱滅活胎牛血清以及其它血清中可能會(huì )存在以下種類(lèi)的沉淀物有以下三種:
        1、纖維蛋白,它是經(jīng)常出現的較大的沉淀物,可以達到1-2mm,可以用肉眼觀(guān)察到。因為血清都是在低溫下進(jìn)行收集和快速處理的,一些纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)在處理過(guò)程中仍然處于溶解狀態(tài),當經(jīng)過(guò)后的過(guò)濾分裝后,就會(huì )在瓶中凝結出現纖維蛋白沉淀。
        2、磷酸鈣,它也是常見(jiàn)的一種沉淀物,通常會(huì )使血清出現渾濁,并且在37°C培養的時(shí)候會(huì )增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察像小黑點(diǎn),這些小黑點(diǎn)由于布朗運動(dòng)看上去可以活動(dòng),因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。
        3、膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是熱滅活胎牛血清中出現沉淀物的常見(jiàn)原因。
        影響:
        1、細胞生長(cháng),我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會(huì )影響細胞培養,我們的客戶(hù)以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。
        2、過(guò)濾,如果血清中出現大量的沉淀物,血清將很難過(guò)濾。一般說(shuō)來(lái),因為在血清生產(chǎn)時(shí)后已經(jīng)經(jīng)過(guò)100nm或者40nm的過(guò)濾處理,并且經(jīng)過(guò)了嚴格的無(wú)菌檢測,因此不推薦再過(guò)濾用于細胞培養的血清。在實(shí)驗室中沒(méi)有必要再過(guò)濾處理血清,在大規模的細胞培養中往往將血清直接加到培養基中一起過(guò)濾。
        3、污染,磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端。研究者可能會(huì )在血清中觀(guān)察到一些絮狀的沉淀,因此就會(huì )比較警覺(jué)的去做無(wú)菌試驗,將血清放在培養箱中培養幾天,結果可能會(huì )觀(guān)察到更多的絮狀沉淀,因此就斷定血清被污染了。并且當研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀(guān)察時(shí)往往可以看到一些可以運動(dòng)的小黑點(diǎn),因此就更加確認是血清被污染了。于是,研究者就會(huì )花費更多的時(shí)間和精力來(lái)和生產(chǎn)商確認,但終確定血清沒(méi)有被污染而只是沉淀。為了避免這些問(wèn)題的發(fā)生,我們建議不要直接將血清放在培養箱中培養觀(guān)察是否有菌,而是將熱滅活胎牛血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養以觀(guān)察是否有細菌生長(cháng)。另外,也可以進(jìn)行革蘭氏染色,在油鏡下觀(guān)察,以確認是否有污染。
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