在生物醫學(xué)試驗中常常會(huì )用到細胞系，指原代細胞培育物經(jīng)傳代成功后所繁衍的細胞群體。也指可長(cháng)期連續傳代的培育細胞。細胞系是經(jīng)過(guò)細胞傳代或續代培育是將細胞從現有的培育物分隔或分出來(lái)開(kāi)端新的培育，并參加新鮮培育液來(lái)促進(jìn)擴增的常用手法?？墒羌毎蹬c新分離的或原代細胞的培育條件相類(lèi)似，但也有一些根本不同的當地：

（1）每個(gè)細胞系需求其特定的成長(cháng)因子混合物

（2）與原代細胞比較，它們的成長(cháng)需求更嚴密的監測，由于使它們無(wú)限成長(cháng)的突變同時(shí)也會(huì )形成它們很快到達過(guò)度成長(cháng)。因而，當細胞系成長(cháng)到了簡(jiǎn)直覆蓋整個(gè)培育器皿底部，也便是90%的密度時(shí)，細胞需求重懸洗滌用于試驗或凍存以備將來(lái)運用，或許重新接種到新的培育器皿進(jìn)一步擴增。

細胞換液注意事項：

首要要注意細胞培育液的色彩，富含營(yíng)養的新鮮培育液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培育液中的營(yíng)養成分時(shí)，開(kāi)端在培育物中堆集廢物和酸性物質(zhì)，下降pH值。因而，許多細胞培育液含有酚紅，當培育物呈酸性時(shí)會(huì )將培育液色彩由橙色變?yōu)辄S色。培育液需在變黃之前替換。當酚紅變?yōu)榉奂t色時(shí)，說(shuō)明培育基pH偏堿，不利于細胞健康成長(cháng)。這時(shí)或許需求改變二氧化碳濃度并替換培育液。許多貼壁細胞系可天然附著(zhù)于無(wú)涂層的塑料上。

因而，塑料細胞培育板如培育皿或六孔板常常用于傳代細胞。塑料的細胞培育瓶也常常用到，如T25的細胞培育瓶，常用于擴增培育數目少的細胞或許開(kāi)端培育成長(cháng)緩慢的細胞系。T75細胞培育瓶常用在培育擴增速度較快的細胞系或用于成長(cháng)超越T25培育瓶容量的很多細胞。在搬運貼壁細胞時(shí)，要先剪切掉細胞上與和塑料結合的蛋白。因而，消化酶胰酶常用于消化細胞?？刂埔让赶臅r(shí)間很重要，由于假如處理時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )損壞細胞外表的蛋白。細胞培育液能中和胰酶。

所以在胰酶消化前常用磷酸緩沖液或PBS洗滌細胞。EDTA，一種鈣螯合劑有時(shí)候也用于提高胰酶的蛋白水解功能。為擴增細胞克隆，將新鮮傳代的細胞培育于細胞培育箱中，挑選適合該細胞成長(cháng)條件，一般為溫度37度，二氧化碳5％和濕度95%。

傳代的不同運用：

人胚胎干細胞是一類(lèi)有必要傳代的細胞。它們一般與小鼠成纖維細胞MEF共培育，后者能供給協(xié)助干細胞堅持其多能性的因子。成善于養殖細胞上的干細胞到了適宜的發(fā)育階段時(shí)需挑出來(lái)?？捎梦⑿鸵埔汗芴舫龌蛴貌ＡЧぞ咻p輕將其刮下然后接種于新的培育液中進(jìn)行擴增。有一些細胞系對酶消化靈敏，或許貼壁很緊無(wú)法運用胰酶處理來(lái)重懸。細胞刮常用來(lái)輕輕將細胞從培育板的底部刮下來(lái)。假如細胞貼壁特別緊，可參加培育液或恰當溶液后用血清吸管用力刮擦。運用該方法時(shí)要當心，細胞比較脆弱，容易在這種機械剝離的方法中受損。為了更快并可重復性的很多擴增細胞到超越單層培育瓶容量的規模，可以運用多層培育瓶，它的培育量可達單層培育瓶的3-5倍。

細胞傳代的操作步驟

首要，重要的是要清楚細胞需求監測的頻頻程度，這取決于該細胞的擴增速度?，F在培育液為亮橙色，再觀(guān)察其它成長(cháng)情況。如培育液是否污濁-如污濁則或許有污染, 細胞的巨細和密度以及細胞的整體質(zhì)量。假如細胞密度到達90%，吸去細胞培育液，用無(wú)鈣離子和鎂離子的磷酸緩沖液洗滌。然后參加胰酶，置于37攝氏度約5分鐘，承認細胞脫壁后，參加新鮮細胞培育液停止胰酶的水解。將懸浮的細胞搬運到錐形管離心。細胞離心下來(lái)后，當心棄去上清，重懸細胞于新鮮培育液。計數收集到的細胞然后依據適宜密度接種細胞當即進(jìn)行擴增或用于將來(lái)擴增。