一. 實(shí)驗目的
植物細胞和組織培養的技術(shù)性強,要求無(wú)菌操作,通過(guò)本實(shí)驗可初步掌握常規的組織培養技術(shù),加深對無(wú)菌操作的了解。
二.實(shí)驗原理
植物的性:植物體的任何一個(gè)細胞都具有生長(cháng)分化成為一個(gè)完整植株的能力,稱(chēng)為植物的性。
植物組織培養就是利用植物的性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養的一門(mén)技術(shù)。植物組織培養按其原始意義,就是指愈傷組織培養。但發(fā)展至今,其范圍日益擴大,已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養。因此,擁有幾種不同水平的培養技術(shù),即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質(zhì)的培養技術(shù)。
本實(shí)驗選擇豌豆為材料,豌豆(Pisumsativum)屬豆科植物,是糧食、飼料和重要的蔬菜作物,也是遺傳學(xué)家和植物生理學(xué)家感興趣和樂(lè )于采用的實(shí)驗植物,豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體,皆可形成愈傷組織,其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養可包括小至十幾微米的莖尖分生組織(生長(cháng)點(diǎn))和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養。在實(shí)踐應用上,常采用生長(cháng)點(diǎn)的培養使患病植物去病毒,以達到挽救優(yōu)良品種,提高產(chǎn)量和質(zhì)量之目的。
三.實(shí)驗材料
儀器設備:1.酒精燈、三角燒瓶,培養皿;2.鑷子、剪刀、剖針;3.雙筒解剖顯微鏡;4.光照培養箱或溫室;
材料煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。
試劑
(1)MS培養基,植物激素:NAA、6-BA等;
(2)飽和漂液(次氯酸鈉);
(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;
(4)無(wú)菌水
四.實(shí)驗步驟
豌豆苗的莖尖培養
⑴取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株,簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖,浸入70%的酒精中1分鐘,再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘,(此步以后要求無(wú)菌)用無(wú)菌水中沖洗5次,在滅菌的濾紙上吸干水分,放入滅菌的培養皿中。
⑵在雙目解剖鏡下,用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長(cháng)錐,用滅菌的解剖針挑取帶著(zhù)兩至三個(gè)葉原基的生長(cháng)錐。
⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養基上誘導愈傷組織形成,用封口膜將培養皿封好。在恒溫培養箱中,26℃下,培養六周,形成愈傷組織,經(jīng)繼代后,可用于生根培養