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胎牛血清運用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題
  • 發(fā)布日期:2019-06-21      瀏覽次數:1313
    • 1、 怎樣貯存和凍結血清才不會(huì )使產(chǎn)質(zhì)量量受損?


      將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須留意的是,融解過(guò)程中必須規矩地搖晃均勻。長(cháng)時(shí)間貯存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)或許集合而形成沉積或可見(jiàn)的混濁。因而,推薦在-20℃以下貯存血清,并防止反復凍融。
      咱們主張血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請勿超越一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,主張無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

       

      2、血清中包括絮狀沉積,它們是什么,怎樣處理?


      沉積包括纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除掉沉積,離心血清(400g,1-2分鐘)或許簡(jiǎn)略的讓其沉積在瓶子底部,將血清當心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不主張采用過(guò)濾的方法除掉沉積,因為沉積會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況悄悄搖擺沉積并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以,運用產(chǎn)品時(shí)要搖擺并加熱血清至37℃,沉積會(huì )自然消失。

       

      3、實(shí)驗室怎樣選擇適合的血清?


      國內一致以為HYCLONE的血清是好的,可是依據我在北美的閱歷,國外一般以為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量,可是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產(chǎn)的就夠用了。此外,因為國內HYCLONE,GIBCO并沒(méi)有生產(chǎn)線(xiàn),咱們只能從代理商那里買(mǎi),而代理商又魚(yú)龍混雜,所以買(mǎi)到假貨的或許性也很大。所以,我一般會(huì )從直銷(xiāo)員那里買(mǎi)血清,有的國外生物公司因為剛剛進(jìn)入我國,度不高,可是其實(shí)在國外現已做得很不錯了,如Wisent等,他們在國內有辦事處,我會(huì )從那里拿,血清的質(zhì)量和HYCLONE平起平坐,但價(jià)格相對優(yōu)惠很多。

       

      4、 怎樣防止血清中發(fā)生沉積?


      按如下操作可防止沉積的發(fā)生:
      (1)凍結血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉積的發(fā)生。
      (2) 血清分裝凍存時(shí),須規矩搖晃均勻(當心勿形成氣泡),使溫度與成分均一。
      (3) 勿直接由-20℃直接至37℃凍結,因溫度改變太大,簡(jiǎn)單形成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉積。
      (4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì )變得污濁,同時(shí)血清中許多較不穩定的成份也會(huì )因而受到破壞,然后影響血清的質(zhì)量。
      (5) 血清的熱滅活十分簡(jiǎn)單形成沉積物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此過(guò)程。
      (6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的準則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì )形成沉積物的增多。

       

      5、小牛血清和胎牛血清有何區別與留意事項?


      來(lái)歷不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

       

      組份與份額不同:兩者所含的促細胞成長(cháng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與份額不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能成長(cháng),而有些細胞只需小牛血清即可,運用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。
      血清保存和運用須留意:血清應保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不行超越一個(gè)月。凍結血清時(shí) ,應先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不行將冷凍的血清直接放入37℃水浴或許溫箱中,如放在37℃凍結,色彩加深,粘稠度也會(huì )添加,血清在凍結和熱滅活后,應按用量分裝并于-20℃保存,防止反復凍融。

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